槟榔碱预处理后的Hacat细胞及人口腔粘膜成纤维细胞中AngⅡ及AT1R蛋白的表达研究

目的:通过检测血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)在不同浓度槟榔碱预处理后的Hacat细胞及人口腔粘膜成纤维细胞(oralmucosal fibroblasts,OMFB)中的表达与分布情况,了解槟榔碱对这两种细胞表达AngⅡ及AT1R的影响,探讨口腔粘膜下纤维性变(OralSubmucous Fibrosis,OSF)可能的发病机制。 方法:采用免疫细胞化学SABC法,分别测定AngⅡ及AT1R兔抗人多克隆抗体在Hacat细胞和OMFB及分别在20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml槟榔碱预处理后的这两种细胞中的表达与分布情况。采用盲法观察阳性反应,通过统计阳性细胞表达率评价AngⅡ及AT1R蛋白的表达情况。 结果: (1)从显微镜下观察,经过槟榔碱尤其是高浓度槟榔碱(80μg/ml)预处理后的Hacat细胞中,有部分细胞发生形态学改变,该部分细胞在视野下分布均匀。 (2)经过0-80μg/ml槟榔碱预处理后的Hacat细胞中AngⅡ蛋白均有表达,80μg/ml预处理组细胞阳性细胞数高于其余三组,其差别有统计学意义(p＜0.01)。 (3)对照组及20μg/ml槟榔碱干预组的Hacat细胞中未见明显AT1R蛋白的表达,40μg/ml槟榔碱干预组细胞中AT1R蛋白呈弱阳性表达,而80μg/ml槟榔碱干预组细胞中AT1R蛋白呈阳性表达,其表达有显著性差异(p＜0.01)。 (4)AngⅡ及AT1R蛋白在Hacat细胞中的表达多位于发生了形态学变化的细胞上。 (5)AngⅡ及AT1R蛋白在对照组及干预组的OMFB中均呈阴性表达,且OMFB经过20-80μg/ml槟榔碱干预48小时后未见细胞有明显形态学变化。 结论: (1)一定浓度的槟榔碱可以诱导Hacat细胞中AngⅡ及AT1R蛋白的表达升高,且二者的表达多位于发生了形态学变化的细胞上,推测AngⅡ及AT1R可能参与了OSF的发病进程。 (2)20-80μg/ml的槟榔碱不能直接诱导OMFB中AngⅡ及AT1R蛋白表达的变化,亦不能使其细胞发生形态学改变。