川续断对脊髓损伤后大鼠的作用及机制

目的：川续断(Dipsacus asperoides)又被称为续断,在本研究中,主要探索中药川续断对脊髓损伤后大鼠的作用和机制。方法：第一部分,取实验用清洁级别SD成年大鼠54只,体重200—250g,随机分为3组：空白组、对照组和实验组,每组18只。按照术后3d、7d、14d的时间节点分三批(n=6)进行实验和取材。空白组只行T9-10椎板切除术,不损伤脊髓,每日给予生理盐水灌胃,对照组行T9-10椎板切除,采取Allen法进行脊髓打击,每日给予生理盐水灌胃。实验组行T9-10椎板切除,进行脊髓打击,每日给予续断提取物灌胃。所有大鼠分别在术后第3d、7d、14d进行Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分,然后处死大鼠,取材。标本均进行尼氏染色,用于神经元细胞的形态学观察,并对染色面积百分比进行分析比较。标本切片也将进行免疫荧光染色,通过检测荧光强度来比较神经生长因子BDNF、NT-3的表达水平。第二部分,取实验用清洁级别SD成年大鼠20只,随机分成两组,每组10只,分别为对照组和实验组,对照组大鼠进行脊髓打击后,每日使用生理盐水灌胃,而实验组大鼠在接受脊髓打击后,每日使用续断提取物灌胃。所有大鼠在术后1周处死取材,对脊髓组织进行髓过氧化物酶(nyeloperoxidase,MPO)活性检测以及HE染色统计脊髓空洞面积。第三部分,采取和第二部分一样的实验动物和分组建模方法,仅在检测指标上采取RT-PCR 和 Weston-Blok检测NF-κB p56和IKK的RNA转录和蛋白表达水平。所有实验结果采取SPSS 19.0软件进行数据分析,计量资料数据采用均数士标准差表示,组间比较采取单因素方差分析,两两比较采取q检验,以P<0.05作为比较具有统计学意义的标准。结果：第一部分中,相比空白组大鼠,对照组和实验组大鼠下肢BBB评分均明显下降,两者的评分结果在术后3天无统计学差异(P<0.05),但在术后7天、14天实验组大鼠评分要高于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。在尼氏体染色的观察中,我们发现在脊髓打击后,实验组和对照组大鼠神经元细胞是有一个逐渐减少的过程,经过对染色面积百分比的统计比较,在术后3d,实验组和对照组无统计学差异(P<0.05),在术后7天和14天的时间节点上实验组大鼠切片中神经细胞染色面积百分比要高于对照组,存在统计学差异(P<0.05)。在荧光免疫法检测神经生长因子BDNF,NT-3的研究中,脊髓打击后实验组和对照组的荧光强度均要高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05),在三个时间节点上,实验组的荧光强度均要高于对照组,存在统计学差异(P<0.05)。 在第二部分中,实验组大鼠的MPO活性水平以及脊髓空洞面积均要低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。第三部分,实验组大鼠F-κB p65和IKK的RNA和蛋白水平均要高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：中药川续断提取物可以通过抑制IKK/NF-κB p65通路的激活,减少炎性因子的释放和白细胞浸润,缓解脊髓损伤后大鼠的继发性脊髓损伤程度,并通过上调神经生长因子BDNF,NT-3的表达,促进神经修复以及大鼠下肢运动功能的改善。