夏天无总碱提取物自微乳化给药系统的研究

夏天无（Rhizoma corydalis decumbentis）为民间常用中药材,自1990年起收载于中国药典。主要有效成分为生物碱类,其中原阿片碱（Pro）是其指标性成分,另外含有较多的延胡索乙素（THP）等成分。夏天无总碱（XA）具有多种药理作用,如降血压、抗心率失常、促进血液循环、解痉镇痛、抗炎、抗凝血、抗老年痴呆症、抗肝损伤等,临床上用于中风偏瘫,半身不遂,小儿麻痹后遗症等。由于Pro等主要有效成分水溶性差,溶出度差,使其生物利用度低。自乳化给药系统（SEDDS）的快速乳化和在吸收部位的高度分散能有效的提高水难溶性药物的口服吸收。本文旨在通过SEDDS提高Pro的溶出,改善其生物利用度。 首先改进了夏天无药材的薄层鉴别条件;采用酸性染料比色法建立了夏天无总碱含量的测定方法;采用HPLC-UV法建立了有效成分的含量和溶出度的测定方法。考察了Pro和THP的基本理化性质,由于是叔胺类生物碱,水溶性差,其在水中的溶解度随着pH值的降低而升高,Pro在pH 5.8,pH 6.8,pH 7.4,和水中的油水分配系数分别为0.734,1.808,2.276,2.338;THP在pH 5.8,pH 6.8,pH 7.4,和水中的油水分配系数分别为1.196,1.317,1.507,1.557。 以总碱和有效成分为考察指标,采用732型强酸性阳离子交换树脂和CO2超临界萃取技术,对夏天无总碱进行了提取和精制。试验结果表明,经过阳离子交换树脂精制后,夏天无总碱含量为76.3%,其中Pro为17.1%,THP为20.3%。经过超临界萃取后,夏天无总碱含量为62.27%,Pro为16.75%,THP为10.80%。 考察了有效成分在不同油相,表面活性剂和助表面活性剂中的饱和溶解度,其中在在助表面活性剂Transcutol P中的溶解度较其他辅料大。通过绘制伪三元相图,以乳化区域面积的大小,以及乳剂的外观对自微乳化系统进行了优选。在此试验基础上,选择了油酸乙酯为油相,Solutol为表面活性剂,Transcutol P为助表面活性剂制备自微乳化制剂。考察了温度、搅拌强度、介质的pH和稀释倍数等外在因素对自乳化效率的影响,最终选择37℃、低速搅拌、蒸馏水稀释500倍作为稀释介质来评价SMEDDS的自微乳化效率。夏天无总碱的加入对自乳化区域无影响,但使自乳化时间延长,所形成乳剂的粒径增大。最终用于溶出度和生物利用度的处方为XA-Ethyl Oleate-Solutol-TranscutolP（5:40:45:15）。当表面活性剂含量从35%增加到70%时,自乳化时间先减小,后增大,在表明活性剂为40%时,体系具有最小的自乳化时间。当助表面活性剂含量从0%增加到60%时,自乳化时间减小,但乳化能力也降低。测定了空白处方和含药处方乳化后所形成微乳的粒径分布。制备的自微乳化制剂20 min时,Pro和THP的溶出度均可达到约80%,而市售片剂的溶出度在20 min时不足20%。稳定性试验表明,XA SMEDDS在冷热循环、高湿条件下较为稳定,Pro和THP的含量在高温和强光条件下下降较多。 以外翻肠囊法考察了主要有效成分在肠粘膜的吸收性质。有效成分在回肠吸收最好。随着浓度的升高,Pro在十二指肠、空肠、回肠的吸收增加,并出现自身浓度抑制作用,表明在各肠段的吸收有可能存在主动转运的过程。pH值降低时,肠吸收降低,说明pH对于生物碱类物质在小肠内的渗透具有一定影响。SMEDDS制剂对Pro的吸收具有一定的促进作用,但对于THP的吸收则存在一定的抑制作用。 建立了灵敏度高、专属性好的LC-ESI-MS方法同时测定大鼠血浆中THP和Pro的浓度,该方法的最低定量限为1ng·mL-1,并成功的应用于药动学研究。 对夏天无自微乳化制剂和普通片剂进行了大鼠体内药物动力学研究,分别给予大鼠夏天无自微乳化制剂和普通片剂。结果表明,与市售片剂相比,给予自微乳化制剂后,Pro的Tmax明显缩短,Cmax显著增加,Products和THP的AUC0-t也相应增加。Pro和THP的相对生物利用度分别为209.7%和133.2%,结果表明与市售片剂相比,XA SMEDD可以明显提高Pro和THP的生物利用度。 本文研究了夏天无总碱及其制剂对四氯化碳、扑热息痛和硫代乙酰胺所致小鼠急性肝损伤的保护作用,并对其可能的作用机制进行了初步探讨,另外观察了对胆汁分泌能力的影响。结果显示,不同剂量的夏天无自微乳化制剂可显著降低CCl4,ACAP和TAA急性肝损伤小鼠血清ATL、AST含量。可以显著降低CCL4,ACAP急性肝损伤小鼠肝组织MDA含量,增强肝组织SOD活力,拮抗小鼠肝组织GSH含量的下降,提高CCL4急性肝损伤小鼠肝组织Ca2+-ATPase活力;但对大鼠胆汁分泌无明显影响。初步药效学研究证明,夏天无总碱具有一定保肝作用,其作用机制可能与清除自由基、抑制脂质过氧化反应、保护肝细胞膜等有关。