补中益气汤指纹图谱及配伍对化学成分影响的初步研究

补中益气汤是李东垣所创益气健脾的代表方。由君药黄芪,臣药党参、白术、甘草,佐药当归、陈皮,使药升麻、柴胡组成。该方在临床运用广泛,疗效确切,药理药效研究有较好的基础,本研究以此经典方为研究对象,探讨配伍对化学成分的影响,具有一定的代表意义。 目的:建立补中益气汤醇提物、氨基酸类成分指纹图谱分析方法及有效成分测定方法,研究配伍对化学成分的影响。为该方质量控制的提供方法,进一步探讨补中益气汤的组方原理及方剂配伍规律的研究提供方法学借鉴,丰富方剂配伍规律研究的内容。 方法:(1)采用HPLC法建立汤剂有效成分(橙皮苷、甘草酸)含量测定方法;(2)采用HPLC-PDA及融合技术建立汤剂醇提物融合指纹图谱,运用HPLC-MFD及柱前衍生法建立氨基酸指纹图谱,采用相关系数、夹角余弦系数及中药色谱相似度软件对指纹图谱进行评价;(3)以君、臣、佐、使为因素,采用正交法进行配伍方案设计;(4)采用直观、方差等统计方法对数据进行配伍分析。 结果:(1)10批补中益气汤双波长融合指纹图谱相似度大于0.98,10批汤剂氨基酸指纹图谱的相似度大于0.99,本实验指纹图谱方法有较好的专属性、稳定性和重现性。 (2)配伍对有效成分的影响:佐药对甘草酸的影响有显著性差异,并降低其含量,君药、使药及两两交互作用对甘草酸含量的影响无显著性差异;君药、臣药对橙皮苷的影响有显著性差异,并增加其含量,使药及两两交互作用对橙皮苷含量的影响无显著性差异。pH值是影响有效成分变化的原因之一。 (3)配伍对醇提物指纹图谱的整体影响:在254nm指纹图谱中臣药、君药是影响指纹图谱的主要因素;在280nm、融合指纹图谱中臣药、佐药是主要因素。 (4)配伍对氨基酸指纹图谱的整体影响:臣药、君药对全方指纹图谱的影响有显著性差异(P＜0.05),佐药、使药及两两交互作用的影响无显著性差异。 (5)配伍对融合指纹图谱中34个峰的影响:君药、佐药对臣药的成分有降低作用;臣药主要增加君药、佐药成分的含量;君药与佐药之间相互影响无统一规律,有些成分含量增加,有些成分含量降低;其他因素对使药成分影响无显著性差异,使药对佐药个别成分含量有增加作用。 结论:指纹图谱及有效成分测定方法稳定性、精密度、重现性均符合要求。双波长融合指纹图谱实现了对指纹图谱的全面和整体评价,氨基酸类成分指纹图谱体现该方15个氨基酸成分含量及比例特征,提高了该方质量控制。本实验从微观上考察了化学成分与中药配伍的相关性,通过复方配伍对化学成分的影响探索复方配伍规律,为配伍规律的进一步研究提供参考。