痛泻要方对IBS模型大鼠FOS蛋白的影响

目的：1.IBS是一种以平滑肌功能失调、内脏高敏感性、肠道菌群失调作为重要临床特征的慢性疾病。据报道欧美地区发病率为10%-20%,我国发病率为5%-12%。其发病原因复杂,罹及全身多脏器病变涉及肠道动力障碍、内脏感觉异常、脑肠轴紊乱、心理因素、肠道菌群失调,从而出现腹痛、腹胀、排便行为和大便性状异常。多年来,IBS研究发展缓慢而不尽如人意。究其原因,IBS研究多采用急性应激动物模型,单纯性地对胃肠动力和内脏感觉等进行症状化地描述,这就在某种程度上阻碍了IBS治疗学的发展。对于临床研究的不足我们采用动物实验来弥补,特别是有关伦理问题和随后可能会出现偏倚的临床研究。因此,表现直观、可反复构建的IBS动物模型对进一步研究、了解IBS的易感因素、发病机制和疾病预防都有非常积极的作用。建立一个涉及消化道动力改变、感觉和行为异常等多因素同时存在的动物模型,不仅可以为探讨这种疾病的发病机理创造有利条件,还可以验证中枢神经系统在IBS发病中的意义。本研究采用中西医结合的方式构建一种新型IBS大鼠模型,目的为IBS这种临床常见病的基础研究提供更完善的动物模型。2.对于IBS的治疗,临床上西医无特效药,治疗方面,认为IBS症状是由钙通道被异常的激活、增加的钙内流导致的动作电位增多的结果,所以临床采用钙通道阻滞剂使病人症状缓解,但实际效果不尽人意。但中医采用辩证的方法治疗IBS具有深厚的历史且效果明显,但机制不清。本研究采用中医治疗泄泻型IBS的经典方,即痛泻要方,对IBS泄泻型大鼠进行治疗,阐述中药防治IBS的科学性和作用靶点,即中药治疗为身心同治,使大鼠的泄泻症状有所缓解并且使大鼠的脑部海马区FOS蛋白含量有所下降,可为IBS防治与药物研发提供实验依据。方法：1.本研究采用已被广泛应用的慢性轻度不可预见性应激的方法构建的经典IBS腹泻型大鼠模型,即经典的抑郁模型。并根据吕红、谭洁描述的方法进行整合,尽量模拟临床IBS病因与发病症状,复合情志与证候多因素建立慢性多因素应激脾胃湿热泄泻型IBS大鼠模型。慢性轻度不可预见性应激让大鼠难以预料将会面临何种刺激,而处于焦虑兼恐惧状态；高糖高脂饲料、高温高湿环境加酒精刺激,是较为成熟的脾胃湿热造模方法。本实验联合上述两种方法,运用中西医结合的方式,制作新型IBS大鼠模型,这种大鼠模型可以较好地模拟人类脾胃湿热腹泻型IBS病因病机及发病症状。2.本研究以痛泻要方为治疗药,对泄泻型IBS模型大鼠进行治疗,对大鼠的脑、肠进行HE染色,对脑部情绪中枢海马区进行免疫组化检测,用平均光密度对免疫组化结果进行统计,揭示痛泻要方调控IBS模型大鼠脑部海马区内FOS含量的影响,阐述中药防治IBS的科学性和作用靶点。3.本研究对治疗后的大鼠脑部海马区及结肠组织进行病理检测及免疫组化检测,发现IBS病理结果和正常组对比并无差异,说明IBS是一种功能性疾病并无器质性改变。另外IBS泄泻型大鼠经中药痛泻要方治疗后脑部海马区FOS含量有所下降,说明痛泻要方治疗本病的作用靶点不只在肠部而且作用在脑,这与西医一直以来认定的IBS病理机制即脑-肠轴机制基本吻合。结果：1.本实验在一定时间内综合运用粪便性状评分、痛阈与肠道敏感性、体重、行为／心理(敞箱实验、糖水摄取量等)等检测方法,获得每只造模动物的5项指标。其中的各项指标与正常组比较,慢性轻度不可预见性应激模型组和慢性轻度不可预见性应激联合脾胃湿热动物模型组有显著性统计学差异(P<0.01)；与慢性轻度不可预见性应激模型组比较,慢性轻度不可预见性应激联合脾胃湿热动物模型组有显著统计学差异(P<0.01)。2.经统计发现,模型组与正常组比较,模型组各项指标如粪便性状评分、痛阈与肠道敏感性、体重、行为、心理等,有显著统计学差异(p<0.01),痛泻要方组和双歧杆菌组差异无统计学意义(p>0.05)；与模型组比较,痛泻要方组及双歧杆菌组体重有统计学差异(p<0.05)；与痛泻要方组比较,双歧杆菌组体重无统计学意义(p>0.05)。3.通过大鼠的脑、肠进行HE染色,对脑部进行免疫组化检测,平均光密度进行统计发现,组与组之间差异具有统计学意义(P<0.05),显示痛泻要方能降低海马FOS表达,推测痛泻要方对中枢FOS变化有调节作用。结论：1.本研究制作新型IBS大鼠模型,即慢性多因素应激脾胃湿热泄泻型IBS大鼠模型,能较好地模拟IBS的病因病机及临床表现,该复合模型与人类脾胃湿热泄泻型IBS的病因病机及临床表现,有较好的可重复性,并且可以持续数月。可用于中医、西医基础研究。2.本研究中痛泻要方在IBS治疗中注重疏肝健脾、心身同治,分别从症状、病机等角度入手,充分展示了IBS的情志病因和心身整体特征。当大鼠出现情志抑郁、焦虑、饮食减少、体质量减轻、倦怠乏力、排便次数增加及大便稀软等症状表现时可能与海马FOS表达升高有关。痛泻要方能降低海马FOS表达,推测痛泻要方对中枢FOS变化有调节作用。中枢FOS的变化可能参与了IBS泄泻型脑-肠互动机制。3.本研究对脑部海马区FOS蛋白表达进行免疫组化检测,发现治疗后大鼠海马FOS蛋白表达有所下降,说明FOS蛋白表达水平的变化可能是用药的作用环节,也说明FOS是调控心理应激反应和抗应激损伤的作用靶点之一。