眼针对肠易激综合征模型大鼠结肠组织5-羟色胺代谢及受体表达影响的研究

目的： 本研究以分子生物学、形态学等检测技术,检测眼针治疗对IBS模型大鼠结肠和血清5-HT及5-HIAA水平,结肠EC细胞表达,结肠TPH1、SERT、5-HT3R和5-HT4R蛋白和mRNA表达水平的影响,旨在从分子水平探讨眼针治疗IBS的5-HT机制,为眼针治疗IBS提供实验依据。 材料与方法： 1.动物造模及眼针治疗 健康SPF级Wistar雄性大鼠30只,分成对照组、模型组、眼针组,采用束缚刺激与应激刺激相结合的方法建立IBS动物模型。模型组、眼针组每日放入自制束缚性鼠笼1h进行束缚刺激,并每日依次交替进行一项下列应激刺激：①禁水24h②置于温箱40℃,5min③电击刺激30V,电击5s间歇5s共120s④冷水游泳14℃,5min⑤禁食24h⑥夹尾180s；共循环3次计18日造模结束。对照组无处理。 眼针组在IBS大鼠造模成功后第二天开始,取下焦区、大肠区、肝区、脾区针刺,定位参照人体取穴方法；用31号13mm毫针,于大鼠眶周2mm处平刺,进针3mm,留针20min,留针期间捻转行针3次,每次1min,每12h针刺1次,针刺7天。 2.指标检测 采用免疫组化方法检测结肠EC细胞并进行分析；ELISA法检测血清和结肠5-HT和5-HIAA水平；Western-Blot法、RT-PCR法检测结肠TPH1、SERT、5-HT3R、5-HT4R的蛋白和mRNA表达。 结果： 1.眼针对IBS模型大鼠一般状态影响 实验过程中动物无死亡。与对照组比较,IBS模型大鼠出现易怒好斗、毛色晦暗、食欲下降等表现；稀便状态持续存在,慢性腹泻形成；观察结肠病理学、结肠转运功能和肠道敏感性等的变化对模型进行评价,依据成模标准表明造模成功。经过眼针治疗后大鼠一般状态明显改善,便质及转运功能逐渐恢复正常。 2.眼针对IBS模型大鼠结肠5-HT和5-HIAA水平的影响 与对照组比较,模型组5-HT和5-HIAA水平均升高(P<0.05),5-HT转化百分率也升高(P<0.05)；而与模型组比较,眼针组5-HT和5-HIAA水平下降(P<0.05),眼针组5-HT转化百分率降低(P<0.05)。 3.眼针对IBS模型大鼠结肠EC细胞表达的影响 与对照组比较,模型组5-HT免疫阳性细胞数量增多(P<0.05),免疫组化染色强度也增强(P<0.05)；与模型组比较,眼针组5-HT免疫阳性细胞数量、免疫组化染色强度显著降低(P<0.05)。 4.眼针对IBS模型大鼠结肠TPH1和SERT表达水平的影响 与对照组比较,模型组TPH1的蛋白和mRNA表达均上调(P<0.05)；与模型组比较,眼针组TPHl表达下调(P<0.05)。与对照组比较,模型组SERT的蛋白和mRNA表达均下调(P<0.05)；而与模型组比较,眼针组SERT表达上调(P<0.05) 5.眼针对IBS模型大鼠结肠5-HT3R和5-HT4R表达水平的影响 与对照组比较,模型组5-HT3R的蛋白和mRNA表达均上调(P<0.05)；而与模型组比较,眼针组5-HT3R表达下调(P<0.05)。与对照组比较,模型组5-HT4R的蛋白和mRNA表达均下调(P<0.05)；而与模型组比较,眼针组5-HT4R表达上调(P<0.05)。 眼针治疗通过下调结肠EC细胞及TPH1表达而降低了5-HT合成代谢水平,同时通过上调SERT的表达而提高5-HT分解代谢水平,使5-HT的合成与分解得以相匹配而协调,5-HT恢复到正常水平,进而IBS大鼠结肠功能得以恢复正常。眼针治疗下调5-HT3R表达,上调5-HT4R表达,使两者恢复至正常水平,这可能是眼针治疗IBS的机制之一。 结论： 1.IBS模型大鼠结肠和血清5-HT和5-HIAA水平升高,5-HT转化百分率也升高；眼针治疗可降低5-HT、5-HIAA水平和5-HT转化百分率,恢复到对照水平。 2.IBS模型大鼠结肠EC细胞及TPH1表达上调,SERT的表达下调；眼针治疗能够使EC及TPH1表达下调,SERT的表达上调。 3.IBS模型大鼠结肠5-HT3R表达上调,5-HT4R表达下调；眼针治疗使5-HT3R表达下调上调,5-HT4R表达上调。