秦艽的组织培养、发根体系建立及发根中次生代谢产物的变化

以秦艽的叶和下胚轴为外植体,成功的诱导出愈伤组织和再生植株。诱导愈伤组织最合适的培养基为附加2mgL-12,4—D和0.5 mgL-16—BA的MS培养基,诱导率可达到100%。愈伤组织转移到附加2 mg·L-12,4—D和0.5 mg·L-1KT和500 mg·L-1LH的MS培养基上进行继代培养,增殖后的愈伤组织转移到附加0.1 mg·L-12,4—D和0.5 mg·L-16—BA的MS分化培养基上进行分化,其分化率可达到86.67%,将分化出的芽转接到不加激素的MS上,结果可生长出大量的分化苗。 运用发根农杆菌A4和LBA9402Bin19分别感染秦艽的外植体,经实验可得,只有在加入6mg·L-1IBA MS培养基上才能成功的诱导出发根,并且以叶片为外植体时,诱导发根的频率最高,其中A4的转化率为87%,LBA9402Bin19的转化率为63%。将发根在无激素的MS培养基上生长时,表现出大量的分枝和无向地性等特点。经除菌和筛选后,将发根转接到不含激素的1/2MS液体培养基上,120 r/min,26±2℃黑暗条件下,发根表现出快速生长的特性,其中A4转化根每天的平均增加量为95mg/g,LBA9402Bin19转化根每天的平均增加量为124mg/g。经过PCR检测可知,A4和LBA9402Bin19的Ri质粒中的T-DNA已经成功的整合到发根的基因组DNA中。同时经过形态观察,经A4和LBA9402Bin19感染转化的发根符合发根的基本形态特点。应用HPLC检测得知,A4转化的发根中的龙胆苦甙含量为0.099%,LBA9402 Bin194转化的发根中的龙胆苦甙含量为0.102%,均高于培养4个月的无菌苗中龙胆苦甙的含量（0.058%）。通过薄层层析检测可知,经A4和LBA9402Bin19感染转化的发根中不仅龙胆苦甙的含量得到了增加,而且,其他成分也得到了增加,更有可能的是,产生了新的物质。