柴胡总皂苷对小鼠部分药物代谢酶及P-糖蛋白的影响

目的： 主要研究柴胡总皂苷(Total Saikosaponins, TSS)对小鼠肝脏细胞色素氧化酶P450主要成员(Cyp3a、Cyp2d22、Cyp2e1和Cyp1a2)、肝脏胞质硫酸转移酶(Sulfotransferase1A1, SULT1A1)及肠道药物转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)活性及其mRNA表达的影响。 方法： 将SPF级小鼠随机分为7组,每组10只,雌雄各半。纯水对照组(10mL·kg-1)、酮康唑组(1.8mg·kg-1)、利福平组(40mg·kg-1)、柴胡皂苷高、中、低、常剂量组(剂量分别为150mg·kg-1、75mg·kg-1、3mg·kg-1)。各组小鼠给予相应供试品灌胃7d,实验当日,对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)以50mg/kg经口投予60min后小鼠断头采血,在低温环境下快速取出肝脏和小肠。用分光光度法测定血中APAP的浓度；采用差速离心法分离肝/肠微粒体和肝胞浆液,以Folin-酚法定量肝/肠微粒体和匀浆中的蛋白浓度,紫外分光光度法测定Cyp3a、Cyp2e1和SULT1A1的酶活性,高效液相色谱法测定Cyp2d22和Cyp1a2的酶活性；制备肠匀浆测定P-糖蛋白偶联的ATP酶活性；用TRIZOL法提取小鼠肝脏总RNA,并用实时荧光定量PCR仪测定Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2e1、SULT1A1及Abcb1b的mRNA表达量。 结果： 血中APAP浓度测定结果和P-糖蛋白偶联的ATP酶活性测定结果显示,柴胡总皂苷各剂量组与对照组之间均无显著性差异(P>0.05)；在肝脏和肠道微粒体实验中,不论以氨基吡啉还是以红霉素为底物测定Cyp3a活性,仅有柴胡总皂苷高剂量组(150mg·kg-1)的Cyp3a活性显著高于对照组(P<0.05),其他剂量组与对照组之间并无显著性差异(P>0.05)；在测定肝微粒体Cyp2e1活性时,柴胡总皂苷高剂量组(150mg·kg-1)和中剂量组(75mg·kg-1)小鼠的Cyp2e1活性显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)；在测定肝微粒体Cyp2d22活性时,柴胡总皂苷高剂量组(150mg·kg-1)和中剂量组(75mg·kg-1)小鼠的Cyp2d22活性显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)；在测定肝微粒体Cyp1a2活性时,柴胡总皂苷高剂量组(150mg·kg-1)活性明显低于对照组(P<0.01),而柴胡总皂苷低剂量组(15mg·kg-1)和常剂量组(3mg·kg-1)活性明显高于对照组(P<0.01)；肝胞浆液中SULT1A1活性测定结果显示,在pH5.5和pH6.5反应体系下,以2-萘酚为底物测定酶活性时,柴胡总皂苷高剂量组和低剂量组小鼠SULT1A1活性均明显高于纯水对照组(P<0.01或P<0.05),而以4-硝基酚为底物测定酶活性时,仅有柴胡总皂苷高剂量组SULT1A1活性显著高于纯水对照组(P<0.01或P<0.05),且柴胡总皂苷对SULT1A1活性的诱导作用呈现剂量依赖性。实时荧光定量PCR测定结果显示,只有柴胡总皂苷在高剂量(150mg·kg-1)时才能够明显诱导Cyp3all和SULT1Al mRNA在小鼠肝脏中的表达水平(P<0.01或P<0.05),该结果与酶活性测定结果一致,而柴胡总皂苷对其它目的基因的表达量没有明显影响(P>0.05)。 结论： 柴胡总皂苷对小鼠肝脏和肠道中的Cyp3a有明显的诱导作用；对肝脏Cyp2el和Cyp2d22的酶活性具有显著的抑制作用；柴胡总皂苷在低剂量时能明显诱导Cyp1a2的活性,而在高剂量时反而抑制其活性；对肝胞浆液中的SULT1A1具有显著的诱导作用,而对小鼠肠道P-糖蛋白的转运活性无影响。