尿酸对血管内皮细胞氧化应激反应的影响及其对细胞的损伤作用

目的 观察尿酸(UA)对人血管内皮细胞氧化应激反应、以及细胞凋亡与坏死的影响。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),以0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L浓度UA分别作用6、12、24及48h,利用流式细胞仪检测HUVEC细胞凋亡率、细胞坏死率、以及活性氧(ROS)含量；采用分光光度计检测HUVEC的超氧阴离子(02-)含量；应用ELISA法检测HUVEC培养上清液中还原型酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、黄嘌呤氧化酶(XO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、环加氧酶-2(COX-2)、脂加氧酶(LOX)水平；同时检测分别使用NADPH抑制剂DPI、XO抑制剂Allo、eNOS抑制剂eNOSR后上述指标的变化。 结果 1.HUVEC与不同浓度UA(0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L)共培养不同时间(6、12、24、48h)后,细胞凋亡率显著性增加,且细胞凋亡率随着UA浓度增加和作用时间延长而显著上升；当UA浓度为0.30g/L、以及作用时间为48h时,细胞坏死率显著性增加。 2.HUVEC与不同浓度UA(0、0.05、0.10、0.20、0.30g／L)共培’养不同时间(6、12、24、48h)后,细胞内ROS及02-表达显著性增加,且随着刺激浓度增加和作用时间延长而显著上升；当UA浓度为0.30g/L、以及作用时间为48h时,细胞内ROS及02-表达明显下降；ROS及02-表达量与HUVEC细胞凋亡率呈正相关关系。 3.HUVEC与不同浓度UA(0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L)共培养24h后,NADPH、XO及eNOS表达量随着UA浓度增加而显著增加,其表达量与HUVEC细胞凋亡率高度正相关；而COX-2及LOX表达量无明显变化,其表达量与HUVEC细胞凋亡率不相关。 4.UA与不同氧化酶抑制剂共刺激HUVEC24h后,UA可激活NADPH、XO、eNOS表达,DPI抑制NADPH及eNOS表达,Allo抑制XO及eNOS表达,eNOSR抑制eNOS表达,且DPI、Allo及eNOSR均可降低ROS及02-表达；UA+DPI+Allo组ROS及02-表达较UA+Allo组显著性降低,但较UA+DPI组无显著性差异；UA+DPI+eNOSR组ROS及02-表达较UA+DPI组及UA+eNOS组均显著性降低。 结论 1.UA呈一定浓度依赖性和时间依赖性促进HUVEC损伤。 2.UA主要通过活化氧化酶NADPH及eNOS从而激活氧化应激反应途径导致HUVEC损伤。