加味大柴胡汤对梗阻性黄疸大鼠肝损伤及JNK、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:本研究以SD大鼠为研究对象,采用结扎胆总管手术造大鼠梗阻性黄疸肝损伤模型,以加味大柴胡汤进行干预,探讨内质网应激通路中IRE1α-ASK1-JNK途径上的相关信号分子在大鼠梗阻性黄疸致肝损伤及加味大柴胡汤干预后的差异表达及可能的分子机制,为临床上应用加味大柴胡汤减轻梗阻性黄疸患者肝脏功能受损及围手术期的治疗,提供理论依据。方法:将90只SD雄性大鼠按随机数表法分为假手术+生理盐水组(S组,n=30);梗黄模型+生理盐水组(O组,n=30);梗黄模型+加味大柴胡汤组(M组,n=30)。O组和M组通过外科手术方法结扎胆总管,经腹正中沿剑突下进入腹腔,游离胆总管并使用外科无菌缝合线双重结扎胆总管;S组从相同部位入腹探查,仅游离胆总管但不予以结扎。S组与O组从术后第一天开始,每日一次以生理盐水灌胃(每次剂量1m L/100g);M组与之同时,每日一次以加味大柴胡汤(MMDB)灌胃(每次剂量1m L/100g),生药量为1g/m L。各组分别于术后第3天、第7天、第10天灌胃1小时后,每次每组随机选取10只大鼠取材,包括心脏血及肝组织。采用HE染色方法观察大鼠肝组织的病理情况;生化分析仪器检测各组血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)及血清总胆红素(TBIL)的含量的变化;Real-time PCR荧光定量检测大鼠肝细胞JNK、Bcl-2 m RNA表达情况;Western Blot蛋白印迹检测大鼠肝细胞JNK、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:1.HE染色大鼠肝组织病理变化:O组与M组大鼠肝细胞索排列结构不齐,边缘模糊,肝血窦显著淤张,胆汁淤积,细胞变性和坏死;S组肝细胞无明显病理变化。2.血清学指标变化:与S组相比,O组、M组大鼠血清中AST、ALT、TBIL含量在各时间点均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与O组相比,M组大鼠血清中AST、ALT、TBIL含量在各时间点均低于O组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.RT-PCR、Western Blot检测大鼠肝细胞JNK、Bcl-2 m RNA及蛋白表达变化:以β-actin为内参蛋白,以S组为对照组,O组、M组JNK m RNA及蛋白水平在各时间点均高于S组,差异具有统计学意义(P<0.05);以O组为对照组,M组JNK m RNA及蛋白水平在各时间点均低于O组,差异具有统计学意义(P<0.05)。以S组为对照组,O组、M组Bcl-2 m RNA及蛋白水平在各时间点均低于S组,差异具有统计学意义(P<0.05);以O组为对照组,M组Bcl-2 m RNA及蛋白水平在各时间点均高于O组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过采用传统外科方法结扎大鼠胆总管成功建立了梗阻性黄疸大鼠模型,梗阻性黄疸发生时,大鼠体内蓄积的胆红素可以造成肝细胞的损伤,引起血清AST、ALT、TBIL含量的升高。加味大柴胡汤在应用于梗阻性黄疸大鼠模型所致的内质网应激肝细胞凋亡的过程中,其机制可能是下调JNK蛋白的表达,同时促进Bcl-2蛋白表达来抑制肝细胞的凋亡,从而使梗阻性黄疸模型大鼠的肝功能得到改善。对于梗阻性黄疸患者的临床治疗,除了适当的手术方式是保障之外,可以中医辨证论治使用加味大柴胡汤,减轻梗阻性黄疸患者肝功能的损伤;中药与外科手术结合应用,以期患者能够依此受益,为临床治疗提供新的治疗思路。