广西山银花提取物绿原酸抗炎作用及其分子机制研究

目的研究广西山银花红腺忍冬提取物体内抗炎效应并进行急性毒性试验,同时探讨提取物主要成分绿原酸体外抗炎作用及其分子机制,为广西道地药用植物的深入开发提供理论和技术支持,加速广西中药现代化的进程。 方法①醇提取回流红腺忍冬干燥花蕾,采用D101大孔树脂分离除杂,浓缩干燥后HPLC测绿原酸含量;②分别设立模型组、阳性药对照组和高、中、低3个给药剂量组,给药剂量分别是20、15、10g·kg-1,灌胃给药,观察提取物对巴豆油混合物致小鼠耳廓肿胀及对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响,并进行急性毒性试验;③收集、纯化、培养大鼠腹腔巨噬细胞(PMФ),随机分为正常对照组、脂多糖(LPS)和钙离子导入剂(A23187)刺激组、阳性对照组和绿原酸Ⅰ—Ⅲ组,绿原酸剂量分别是50,100,200mg·L-1。LPS和A23187刺激复制细胞炎症模型,镜下观察细胞形态学改变;MTT比色法检测绿原酸对细胞生长活性的影响;LPS长时间刺激PMФ,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)含量,用PGE2的含量表示COX-2的活性;A23187短时间刺激PMФ,放射免疫分析法测定培养上清液6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的含量,以此表示COX-1的活性。 结果①HPLC测定提取物绿原酸含量为24.3%;②提取物高、中、低剂量对巴豆油混合物致鼠耳肿胀有明显抑制作用,高剂量组与阳性对照组比较无统计学差异;在角叉菜胶致足趾肿胀模型中,中、高剂量组能显著抑制肿胀度。最大给药剂量内小鼠未出现死亡;③LPS刺激后,镜下观察细胞多由圆形变为梭形;④绿原酸在31.25 mg·L-1至1000 mg·L-1范围内对细胞基本无抑制作用;⑤正常对照组细胞上清液TNF-α、IL-6及PGE2的表达少,给予LPS刺激后上述指标大量表达,除绿原酸50 mg·L-1组TNF-α含量与LPS刺激组相比无统计学意义外,其余各浓度组TNF-α、IL-6及PGE2含量与LPS刺激组比较有显著性差异,呈剂量依赖性;⑥A23187可诱导大鼠腹腔巨噬细胞产生6-keto-PGFlα,不同浓度绿原酸对6-keto-PGFlα的生成呈抑制或促进作用。 结论广西山银花红腺忍冬提取物对急性炎症有明显抑制作用且毒性低。山银花提取物主要成分绿原酸具有体外抗炎作用。其抗炎作用可能通过抑制TNF-α、IL-6等炎症因子的活化以及影响花生四烯酸(AA)代谢途径的COX-2活性来发挥抗炎作用。