大环内酯类药物对金黄色葡萄球菌毒力因子的抑制机制研究

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)是社区获得性和医院感染性疾病常见病原体之一，具有较高的发病率和死亡率。该病原体引起的感染临床症状复杂多样，从局部的皮肤感染到严重败血症，甚至包括中毒性休克综合征。金黄色葡萄球菌的致病性与其它革兰氏阳性菌相似，在很大程度上都取决于产生的胞外毒力因子。目前，已证明金黄色葡萄球菌可产生多种毒力因子，并与感染的发病机制有关。因此，抗生素的临床疗效不仅取决于其自身的杀菌或抗菌活性及药物动力学，还与药物对细菌毒力因子释放的影响有关，尤其是在亚抑菌条件下的作用。所以，寻找抑制毒力因子的抗生素用以治疗金黄色葡萄球菌所致疾病具有科学研究价值和重要临床意义。 为了全面了解大环内酯类药物的抗菌作用，根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)的指导方针，通过微量稀释法测定了阿奇霉素、克拉霉素、红霉素对金黄色葡萄球菌ATCC29213、临床分离株SA2985、金黄色葡萄球菌8325-4及其hla基因缺失株DU1090悬浮菌的最小抑菌浓度(MICs)和最小杀菌浓度(MBCs)；用平板擦拭法测定了生物被膜的最小抑菌浓度(MBICs)和最小杀菌浓度(MBBCs)，并用生物被膜形成和解离实验进一步验证了大环内酯类药物对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响。结果表明：大环内酯类药物对金黄色葡萄球菌悬浮菌和生物被膜具有较好的抗菌活性，其中临床分离株SA2985对红霉素具有耐药性，并且三种药物对生物被膜均表现出较低的杀菌能力；生物被膜形成实验表明亚抑菌浓度的大环内酯类药物可有效地抑制生物被膜的形成，并且证明了生物被膜结构的主要成分为蛋白质类物质。 大环内酯类药物对金黄色葡萄球菌ATCC29213毒力因子的抑制作用研究通过western blot、溶血素分析和纤维蛋白原粘附实验进行测定。结果表明：大环内酯类药物以剂量依赖式的方式抑制毒力因子的分泌，其中阿奇霉素对α-溶血素、金黄色葡萄球菌肠毒素A和B都具有较好的抑制作用，而克拉霉素和红霉素只对α-溶血素、金黄色葡萄球菌肠毒素B具有抑制作用；溶血素分析和纤维蛋白原粘附实验表明，亚抑菌浓度的阿奇霉素对金黄色葡萄球菌溶血素具有极显著的抑制作用，同时对纤维蛋白原的粘附作用也具有较好的抑制作用。 利用实时荧光定量PCR分析阿奇霉素对金黄色葡萄球菌ATCC29213毒力因子基因hla、sea、seb及其调控基因agrA的抑制作用。结果表明：亚抑菌浓度的阿奇霉素以剂量依赖式的方式抑制毒力基因hla、sea、seb及其调控基因agrA的表达，并且表达差异量的变化不同。 本研究结果表明大环内酯类药物具有较好的抗菌活性和抗毒素作用，因其亚抑菌浓度时可抑制金黄色葡萄球菌毒力因子的释放，将有助于治疗由金黄色葡萄球菌导致的感染。