帕罗西汀预防大鼠创伤后应激障碍的实验研究

创伤后应激障碍(Posttraumatic stress disorder, PTSD)是指机体在遭遇异乎寻常的威胁或灾难,(如:自然灾害、残酷的战争经历、严重的性骚扰或强奸等)所导致的延迟出现并长期持续的精神障碍。PTSD患者的主要症状有:病理性重现、恶梦惊醒、持续性警觉性增高和回避,以及对创伤经历的选择性遗忘和对未来失去信心。 由于各种大杀伤性武器的使用,现代战争中出现了大量因应激导致精神障碍特别是创伤后应激障碍而造成的人员减员,进而严重影响他们战后正常的社会生活。因此如何减轻创伤后应激障碍带来的伤害就成了军事医学上亟待解决的问题。 目前对PTSD的治疗集中于心理辅导和药物治疗两方面。药物治疗上,抗抑郁药,尤其是选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)由于在现有手段中,相比其它药物来说具有较好的减弱PTSD症状的效果和较少的不良反应而获得了广泛关注,其中帕罗西汀和舍曲林已经被美国FDA批准用于临床治疗PTSD。但是总体来说,当患者出现PTSD症状后再进行药物治疗,取得的疗效有限,仅能减轻部分症状。而在应激前或者是应激后患者还未出现PTSD症状时,及时给予药物进行干预能否取得较理想的效果,至今未见文献报道。 本研究在建立大鼠单一延长结合足底电击刺激(SPS&S)模型的基础上,运用电击箱、中性实验箱、高架十字迷宫(The elevated plus maze, EPM)、旷场实验、Morris水迷宫(MWM)等测试行为学方法,探讨在大鼠应激前及大鼠应激后,尚未表达类PTSD症状时给予帕罗西汀进行预防治疗,对大鼠的激越行为、恐惧反应、焦虑行为、运动能力、学习和记忆能力的影响。为临床防治PTSD时用药的介入时机提供新的思路。 目的: 1.制备合理的、应激动物行为表现与临床PTSD症状拟合度高而且重复性好的动物实验模型。 2.探讨应激后及时预防性给予大鼠帕罗西汀对其恐惧反应、焦虑行为、运动能力、空间和学习记忆能力的影响。 3.探讨不同时间点预防性给予大鼠帕罗西汀对其激越行为、恐惧反应、焦虑行为、运动能力、空间和学习记忆能力的影响。 方法: 1. PTSD动物模型- SPS&S模型的建立: 8周龄雄性SD大鼠,由第四军医大学实验动物中心提供。分笼饲养,每笼3只。12h光亮/黑暗条件(光照时间:早8点-晚20点),环境温度为22-25度。两周适应期后,大鼠被随机分为四组:空白对照组:(Sham+Veh),单纯应激组:(SPS&S+Veh),对照给药组:(Sham+PRX),应激给药组:(SPS&S+PRX)。给药大鼠所需要的帕罗西汀按照0.1mg/ml的剂量溶于食水,大鼠接受SPS&S应激后即给予供给,持续14天。对照组大鼠饮用蒸馏水。应激组大鼠接受SPS&S (即:先束缚两小时,强迫游泳20分钟,休息15分钟后,乙醚麻醉至失去知觉,恢复知觉后再放入电击箱中接受不可避性足底刺激),应激期间禁食禁水。对照组在每日相应时间同样禁食禁水。应激后第1、7、14天观察条件性恐惧反应和致敏化恐惧反应,应激后第15天在旷场中观察自发活动能力,在高架十字迷宫中观察焦虑样反应。第16天在MWM开始测试学习和记忆能力 2.应激后及时进行帕罗西汀药物干预对大鼠行为能力及空间学习记忆能力的影响 实验动物为40只成年雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、对照给药组(0.1mg/ml帕罗西汀)、单纯应激组、应激给药小剂量组(0.1mg/ml帕罗西汀);应激给药大剂量组(0.2mg/ml帕罗西汀),每组各8只。给药大鼠所需要的帕罗西汀按照0.1mg/ml或0.2mg/ml的剂量溶于食水,大鼠接受SPS&S应激后即给予供给,持续14天。对照组大鼠饮用蒸馏水。应激后第14天观察条件性恐惧反应和致敏化恐惧反应,应激后第15天在旷场中观察自发活动能力,在高架十字迷宫中观察焦虑样反应,应激后第16-21天观察大鼠在Morris水迷宫中的学习和记忆能力变化。 3.应激前及时进行帕罗西汀药物干预对大鼠行为能力及空间学习记忆能力的影响及与应激后进行药物干预效果对比。 实验动物为36只成年雄性SD大鼠,随机分为单纯应激组、应激前给药组、应激后给药组,每组各12只。给药大鼠所需要的帕罗西汀按照0.1mg/ml溶于食水,依据组别不同,分别在大鼠接受SPS&S应激前14天给予供给,应激当天结束(应激前给药组)和大鼠接受SPS&S应激后即给予供给,持续14天(应激后给药组)。对照组大鼠饮用蒸馏水。应激后第1、7、14天观察大鼠激越行为反应,其他观察指标及时间安排与实验2相同。 结果: 1.大鼠SPS&S应激后恐惧反应、焦虑样行为、自发活动能力及学习和记忆的影响。 经过SPS&S后,与空白对照组相比,单纯应激组大鼠的静止时间明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在14天的孵育期中应激组大鼠条件性恐惧环境下的静止时间保持不变,而致敏化恐惧环境下的静止时间逐渐增加。在高架十字迷宫中应激大鼠开放臂进入次数百分比和开放臂停留时间百分比明显减少(P<0.05)。旷场实验中各组大鼠的自发活动能力没有区别。单纯应激组大鼠在MWM水迷宫中的上台潜伏期明显延长;目标象限时间占入水总时间百分比和穿台次数明显减少,SPS&S严重影响了大鼠的学习和记忆功能。 2.及时服用帕罗西汀进行应激后干预对应激大鼠恐惧反应、焦虑样行为、自发活动能力及学习和记忆的影响。 条件性恐惧反应测试中,应激后给药组的静止时间少于单纯应激组(P <0.05)。致敏化恐惧反应测试中,应激后给药组的静止时间少于单纯应激组(P<0.05)。高架十字迷宫中,给药大鼠在开放臂的停留时间百分比和开放臂的进入次数百分比上显著增加(P<0.05)。应激后给药组大鼠与单纯应激组相比,上台潜伏期明显减少(P<0.01),目标象限时间与入水总时间百分比和穿台次数明显增加(P<0.05),应激后及时给予帕罗西汀显著改善了应激大鼠的学习和记忆能力。 3.及时服用帕罗西汀进行应激前干预对应激大鼠激越行为、恐惧反应、焦虑样行为、自发活动能力及学习和记忆的影响,以及与应激后及时干预的效果对比。 SPS&S增强大鼠的激越行为,随着放置时间延长,这种效应越发明显。SPS&S前以及SPS&S后早期给予PRX(0.1mg/ml)显著降低这种激越行为。条件性恐惧反应测试中,应激前给药组的静止时间少于单纯应激组(P <0.05)。应激前给药组的静止时间与应激后给药组相比无明显差距。致敏化恐惧反应测试中,应激前给药组和应激后给药组的静止时间均少于单纯应激组(P<0.05)。应激前给药大鼠在高架十字迷宫中的开放臂进入次数百分比和开放臂停留时间百分比上明显增加(P<0.05)。应激前给药组与应激后给药组相比无明显差距。应激前给药大鼠上台潜伏期明显减少(P<0.05),应激前给药大鼠在目标象限时间与入水总时间百分比和穿台次数明显增多(P <0.05),应激前给药组与应激后给药组相比无明显差距。 结论: 1.SPS&S应激后,单纯应激组对比空白对照组组表现出了明显的恐惧反应。随着时间的延长条件性恐惧反应保持不变;致敏化恐惧反应增加;应激对焦虑样行为及学习和记忆能力有明显影响,无论是否应激都不能改变它的自发活动能力。 2.SPS&S应激后及时服用帕罗西汀干预可以明显改善大鼠的激越行为、恐惧反应、焦虑样行为表现及学习和记忆能力,但对自发活动能力没有影响。 3.SPS&S应激前及时服用帕罗西汀干预可以明显改善大鼠的激越行为、恐惧反应、焦虑样行为表现及学习和记忆能力,但对自发活动能力没有影响。