大黄和补骨脂药材的指纹图谱及其精制工艺研究

目的: 中药是天然产物的宝库,但因其成分复杂,质量难以控制,随着现代分析技术的发展,出现了指纹图谱技术、液-质联用技术等,为讲清其有效组分群、化学物质基础提供基础,更进一步的控制了中药材的内在质量。大黄味苦,性寒,是泻下药之首选;补骨脂味辛、苦,性温,为补肾助阳,纳气平喘,温脾止泻之良药。这两味中药是烟草添加剂的首选,本论文以其为代表,对其指纹图谱、化学物质基础进行研究,并根据其有效成分组对其进行精制,一方面详细阐述了现代分析技术在中药质量控制中的应用,另一方面对为中草药加入烟草中作为添加剂的使用提供理论依据。 方法: 1采用HPLC/DAD技术对大黄药材提取液进行分析,建立大黄药材的指纹图谱方法,并通过相似度评价系统对收集的10个批次大黄药材进行质量评价。 2采用液-质联用技术对大黄药材中蒽醌类、鞣质类等成分定性分析,完成大黄药材的化学物质基础研究。 3采用大孔吸附树脂分离技术,对适合分离大黄提取液中蒽醌成分的树脂进行筛选,动过静态吸附解析以及动态吸附解析实验对大黄提取液的纯化方法进行优化,获得稳定的精制工艺。 4采用HPLC/DAD技术对补骨脂药材提取液进行分析,建立补骨脂药材的指纹图谱,应用国家药典委员会开发的《指纹图谱相似度》软件评价不同批次补骨脂药材的质量。 5采用HPLC/DAD/TOF-MS以及HPLC/DAD/TOF-MS技术研究补骨脂药材的化学物质基础研究。 6筛选合适的大孔吸附树脂作为精制补骨脂提取液的最佳树脂,以补骨脂素和异补骨脂素含量为指标,采用单因素考察的方法对大孔树脂纯化工艺进行优化,获得较好的精制工艺。 结果: 1建立了大黄药材的液相指纹图谱方法,对10批次大黄药材HPLC/DAD指纹图谱进行了方法学考察,确认了22个共有峰,建立了大黄药材对照指纹图谱,并通过相似度评价软件计算得出10批次大黄药材相似度为0.980,结果良好。 2建立了大黄药材的HPLC/DAD/TOF-MS以及HPLC/DAD/TOF-MS的总离子流指纹图谱,通过HPLC/DAD的紫外光谱定性分析出6个成分,通过液-质联用技术,结合TOF-MS与TRAP-MS确定大黄中14个化学成分。 3确定大黄提取液的精制工艺为:吸附条件为2 BV/h的流速,上样样品初始浓度为0.05g /mL,上样为48mL;洗脱条件为:洗脱液浓度为90%乙醇,乙醇洗脱液用量约为13倍柱体积,脱速率为3 BV/h。 4建立了补骨脂药材的液相指纹图谱方法,确认了20个共有峰,分析10批次补骨脂药材,建立了大黄药材对照指纹图谱,并通过相似度评价软件计算得出10次补骨脂药材相似度为0.995,结果良好, 5通过分析补骨脂药材的HPLC/DAD/TOF-MS以及HPLC/DAD/TOF-MS的总离子流指纹图谱,共鉴定出补骨脂药材中的9个成分。 6确定补骨脂提取液的精制工艺为:吸附条件为3 BV/h的流速,上样样品初始浓度为0.05g /mL,上样为64 mL;洗脱条件为:洗脱液浓度为60%乙醇,乙醇洗脱液用量约为10倍柱体积,脱速率为12 BV/h。 结论: 1建立的大黄药材指纹图谱方法学良好,大孔树脂纯化工艺稳定,所建立的液-质联用方法能够为大黄药材的质量控制提供理论基础。 2建立的补骨脂药材指纹图谱方法学良好,大孔树脂精制工艺稳定,所建立的液-质联用方法能够为补骨脂药材的质量控制提供理论基础。