葡多酚对胰腺细胞增殖活性的影响作用研究

目的 葡多酚（Grape procyanidins, GPC）是从葡萄籽中提取的天然植物多酚类物质。国内外研究报道具有抗氧化、抗自由基、抗辐射、抗肿瘤等多种生物学功效。本研究以小鼠胰腺细胞为模型,通过体内实验和体外实验两种方法,观察GPC对正常胰腺细胞和受损伤胰腺细胞增殖活性的影响作用。 方法 1.体外实验:GPC对体外培养的小鼠胰腺细胞增殖活性的影响取小鼠正常胰腺细胞与不同浓度的GPC共同体外培养,再分别加入H2O2和葡萄糖,产生氧自由基和氧化代谢产物从而影响胰腺细胞的增殖活性,用MTT法观察GPC对氧自由基引发的胰腺细胞增殖活性损伤的保护作用、GPC对高糖环境下胰腺细胞增殖活性的影响以及GPC对正常胰腺细胞增殖活性的影响。 2.体内实验:GPC对小鼠胰腺细胞增殖活性急性与亚慢性辐射损伤的防护 2.1 GPC对小鼠胰腺细胞增殖活性急性辐射损伤的防护 健康昆明种小鼠每日空腹灌胃GPC,每天1次,连续5天（低剂量组50mg/kg,高剂量组150mg/kg）。末次灌胃后第2天,用60Co-γ射线进行1次全身性辐照,小鼠单次照射总吸收剂量为5.0Gy,辐照后第2天放血处死动物,取胰腺制备细胞悬液,用MTT法检测细胞的增殖活性,计算细胞增殖率;用流式细胞仪分析细胞凋亡率;用免疫细胞化学法检测bc1-2和bax蛋白的表达。 2.2 GPC对小鼠胰腺细胞增殖活性亚慢性辐射损伤的防护健康昆明种小鼠灌胃给予GPC（低剂量组50mg/kg,高剂量组150mg/kg）,每天1次,连续4周,期间用印60Co-γ射线进行辐照,每周5次,连续4周,小鼠单次照射吸收剂量为0.125Gy,总剂量为2.5Gy。末次辐照后第2天处死动物,取胰腺用MTT法测定细胞的增殖活性,计算细胞增殖率;用电镜观察细胞超微结构的变化;用免疫组化染色试剂盒检测bcl-2和bax蛋白的表达。 结果 1.体外实验 1.1 GPC对正常胰腺细胞增殖活性的影响 50、100 μg/mlGPC组的增殖活性分别为0.158±0.099和0.273±0.004,高于正常对照组和10μg/ml GPC组,差别均有显著性意义。结果提示GPC可促进正常胰腺细胞的增殖活性,并呈现剂量效应关系。 1.2 GPC对H2O2损伤胰腺细胞增殖活性的影响2.0mmol/l H2O2组细胞不加GPC时的增殖活性为0.053±0.006,均低于加入GPC组和正常对照组。表明胰腺细胞受到H2O2损伤,