马尾藻多糖的分离、纯化及其作为免疫佐剂对猪PRRS病免疫效果的影响研究

以广西北海涠洲岛特有的马尾藻为原料，探索了马尾藻多糖的提取分离及纯化方法，测定了多糖的分子量及其单糖构成。并利用马尾藻多糖作为佐剂探索其对疫苗免疫效果的影响。 1．马尾藻多糖的提取分离及纯化 采用超声波细胞破壁的方法对马尾藻进行预处理，作用时间20分钟，80℃水浴1小时，过滤，离心，浓缩，用工业酒精沉淀出多糖，干燥后得粗多糖，提取率为13.12％，比传统热提法提高8.73％，比胶体磨法提高1.39％，而提取时间分别比胶体磨法和传统热提法缩短300分钟和420分钟。粗多糖再经过滤、酶解与透析后得到多糖SP。 通过DEAE—纤维素层析对马尾藻多糖SP进行分离，得出粗多糖由SP-Ⅰ、SP-Ⅱ、SP-Ⅲ三种组分组成，其所占比例分别为31.4％、23.8％和8.1％。再经SephadexG-100凝胶柱层析进一步分离纯化得到均一的多糖组分SSP-Ⅰ、SSP-Ⅱ、SSP-Ⅲ。凝胶色谱法测定这三种多糖组分的分子量为53862、46536和49866。高效液相色谱分析SSP-Ⅰ、SSP-Ⅱ均由阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比分别为0.012：0.18：0.676：0.144和0.015：0.178：0.685：0.122；SSP-Ⅲ由鼠李 广西大学硕一!:学位论文 糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比为0.039:0.1 21:0.726:0.1 14。 2.马尾藻多糖佐剂对猪pRRS疫苗免疫效果的影响 用多糖sP按低剂量组(50mg)、中剂量组(1 00mg)、高剂量组 (200mg)分别与猪PRRS灭活抗原配制成完全佐剂疫苗，免疫5组非猪 PRRsV免疫猪，每组5头，设空白组和普通佐剂疫苗组作对照，于首 免的第0天、20天、40天、50天采血，测定体液免疫和细胞免疫水 平。试验结果表明:(1)各多糖佐剂组T淋巴细胞转化率(61 .4%、 65%、63.4%)均高于空白组(52.8%)及普通佐剂疫苗组(59.6%)， 各多糖佐剂组与空白对照组间差异显著(p<0.05);(2)各多糖佐剂 组的丁淋巴细胞亚群数量均高于空白组和普通佐剂疫苗组，其中以 co3的数量差异最明显(p<0 .05)，但多糖组与普通佐剂疫苗组的CDS 和NK细胞亚群的测定值差异不显著。(3)间接ELASA法测定各多糖 佐剂组血清中抗体的活性(0.631、1 .015、0.688)均高于两对照组 (0.518、0.568)，其中1 oomg多糖佐剂组与对照组间的差异显著 (P(0 .05)。 研究结果表明:以马尾藻多糖作为佐剂即可以提高体液免疫水 平，又能增强细胞免疫功能，其中100mg多糖剂量的总体效果最佳。