黄芪多糖、人参皂甙Rb1对猪口蹄疫疫苗的佐剂效果及相关机理研究

本试验目的旨在以两种补气中药成分为代表,对中药成分作为疫苗佐剂机制进行研究。进行本试验期望得到一种新型的、经济的猪口蹄疫疫苗的佐剂,提高现有疫苗的保护力,降低现有疫苗的副作用,降低猪口蹄疫的发病率,减少劳动费用,即这种佐剂能刺激机体产生较强的体液免疫和细胞免疫反应,同时,通过对佐剂作用机制的探索,将给新的佐剂开发提供一些试验方法,具有良好的研究意义。试验以常用补气中药黄芪和人参的主要有效成分——黄芪多糖和人参皂甙Rb1为代表,首先黄芪多糖和人参皂甙Rb1直接与口蹄疫疫苗混匀,通过肌肉注射免疫小鼠和猪,观察口蹄疫抗体效价的变化。试验结果:小鼠一免15d抗体效价与对照组差异不显著HAlog2<7(p>0.05),二免后的小鼠抗体效价HAlog>7与对照组比较差异极显著(p<0.01);黄芪多糖(0.5 mg/只)+疫苗组、黄芪多糖(0.1mg/只)+疫苗组和人参皂甙Rb1(0.01 mg/只)+疫苗组与对照组差异极显著(p<0.01),黄芪多糖(0.05 mg/只)+疫苗组和人参皂甙Rb1(0.002 mg/只)+疫苗组与对照组差异显著(p<0.05)。经过免疫的猪一免后抗体效价都没有达到保护免疫效价(HAlog2<7),二免15 d抗体效价远远高于一免的抗体效价(HAlog2>7),二免30 d抗体效价比二免15 d有些下降,但是高于只经过一免的抗体效价(HAlog2>7)。总之黄芪多糖和人参皂甙Rb1均能提高小鼠和猪只的口蹄疫抗体效价,并且随着两种成分浓度的增加对抗体效价的影响也随之增强。随后进行大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的培养。通过对内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原和硝酸银鉴定,证明培养的微血管内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原染色为阳性,AgNO3染色后,黑色的硝酸银颗粒沉积在血管内皮细胞边缘即细胞间隙中,呈棕黄色,细胞间以锯齿状结构连接,体现血管内皮细胞呈现典型的多边形。最后黄芪多糖、人参皂甙Rb1和口蹄疫疫苗同时作用细胞,继续培养一段时间观察内皮细胞NO、IL-6和TNF-α分泌量的变化。试验结果:口蹄疫疫苗(0.1μL/mL)单独作用于肠黏膜微血管内皮细胞,微血管内皮细胞分泌的NO、IL-6和TNF-α极显著的高于对照组(p<0.01);黄芪多糖(450μ g/mL)和人参皂甙Rb1(40μg/mL)分别与口蹄疫疫苗(0.1μL/mL)联合作用细胞,微血管内皮细胞分泌NO、IL-6和TNF-α比单独疫苗作用减少,比对照组分泌量高(p<0.05或p<0.01)。结果表明:黄芪多糖和人参皂甙Rb1均能起到疫苗佐剂的作用,提高口蹄疫疫苗的抗体效价和保护微血管内皮细胞免受损伤的作用。