大黄蛰虫丸改善肢体缺血的实验研究

目的：观察大黄蛰虫丸对后肢缺血大鼠的缺血肢体的改善情况，为临床使用大黄蛰虫丸治疗肢体缺血性疾病提供依据。 材料和方法：采用SD大鼠32只，随机分为4组：空白对照组、模型对照组、大黄蛰虫丸低剂量组、大黄蛰虫丸高剂量组。每组8只，除空白对照组外，其余3组大鼠采用右下肢股动脉部分切除的方法制作缺血模型。各组大鼠均于造模后次日开始灌胃给药，连续21天。自造模之日起每日观察大鼠的生存活动情况。处死动物后取切除部分股动脉侧下肢肌肉制作标本，检测肌肉中缺氧诱导因子（HIF-1）和血小板膜糖蛋白（CD31）的表达并观察病理切片。 结果： 1.空白对照组大鼠一切活动情况良好；模型组大鼠缺血肢体的缺血症状越来越重，最后缺血肢体的远端甚至出现发黑、坏死；给药组大鼠缺血肢体的缺血症状逐渐缓解，缺血肢体逐渐恢复基本的日常功能，其中以高剂量组最为明显。 2.缺血缺氧侧下肢肌肉缺氧诱导因子（HIF-1）表达：模型对照组、大黄蛰虫丸高剂量组和大黄蛰虫丸低剂量组的平均光密度值均高于空白对照组（p<0.01），有统计学意义；模型对照组平均光密度值低于大黄蛰虫丸高剂量组和大黄蛰虫丸低剂量组(p<0.01)；给药组缺氧诱导因子（HIF-1）的表达均高于模型对照组，有统计学意义。并且，大黄蛰虫丸高剂量组的平均光密度值高于大黄蛰虫丸低剂量组（p<0.01），有统计学意义。由此可见，缺血缺氧可以诱发组织缺氧诱导因子（HIF-1）的表达，而大黄蛰虫丸可进一步增加缺血缺氧组织缺氧诱导因子（HIF-1）的表达，尤其以大黄蛰虫丸高剂量组作用最为明显。 3.血小板膜糖蛋白（CD31）表达：模型对照组、大黄蛰虫丸高剂量组和大黄蛰虫丸低剂量组的平均光密度值均高于空白对照组（p<0.01），有统计学意义；模型对照组平均光密度值低于大黄蛰虫丸高剂量组和大黄蛰虫丸低剂量组(p<0.01)；给药组血小板膜糖蛋白（CD31）的表达均高于模型对照组，有统计学意义。并且，大黄蛰虫丸高剂量组的平均光密度值高于大黄蛰虫丸低剂量组（p<0.01），有统计学意义。由此可见，缺血缺氧可以诱发组织血小板膜糖蛋白（CD31）的表达，而大黄蛰虫丸可进一步增加缺血缺氧组织血小板膜糖蛋白（CD31）的表达，尤其以大黄蛰虫丸高剂量组作用最为明显。 结论：因为缺氧诱导因子（HIF-1）的靶基因为血管内皮生长因子(VEGF)，血管内皮生长因子(VEGF)基因s’端启动子中有一28kb的增强子片段，内含缺氧诱导因子-1（HIF-1）结合位点，该片段与缺氧时血管内皮生长因子(VEGF)基因转录率增加有关。缺氧诱导因子(HIF-1)与相应的DNA结合，进而激活了HIF-1a羧基端转录活性区，这些变化增加了HIF-1a羧基端与P300/CBP-CH1的结合力，后者为核磷酸蛋白，是HIF-1调控DNA的重要信号传导蛋白。激活的HIF-1a通过该核磷酸蛋白将转录信号传给血管内皮生长因子(VEGF)，开始发挥其转录活性。血管内皮生长因子(VEGF)是特异性促进血管内皮细胞有丝分裂、调节血管生成的因子并可独自诱导新生血管形成。血管生成是原始血管丛或已存在的血管经芽生或其他方式形成新的血管的过程； 同时，血小板膜糖蛋白（CD31）是分子量为130kD的跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，主要分布在脉管细胞上，尤其在培养的血管内皮细胞的连接处有高水平表达。与血管形成关系密切,在体内血管形成中起重要作用。所以，大黄蛰虫丸可以通过增加缺血缺氧组织缺氧诱导因子（HIF-1）和血小板膜糖蛋白（CD31）的表达，进而诱导新生血管的形成，从而改善缺血缺氧的肢体的缺血症状，并且，大黄蛰虫丸高剂量组的作用优于大黄蛰虫丸低剂量组，为临床应用大黄蛰虫丸治疗缺血性疾病提供了理论依据。