利用RAPD、ISSR标记分析鄂西地区柚种质资源遗传多样性

我国是柑桔的起源中心和遗传变异中心之一，柚的品种资源十分丰富。本研究以分布在鄂西的柚种质资源为对象，利用RAPD和ISSR分子标记对其进行研究，分析鄂西柚品种（类型）的遗传多样性。结果如下： 1．对照常规RAPD和ISSR工作分析程序，在对鄂西柚种质资源分析时作了部分调整，如DNA提取，PCR反应体系等细节。建立了一套适合于分析柚种质资源的RAPD和ISSR反应体系。本研究中建立的适合于柚种质资源分析的RAPD最佳反应体系为：DNA（20ng／μL），引物（1μmol／e），MgCh（1.5mM），TaqDNA聚合酶1.5U，dNTPs（200μmol／L），PCR循环程序：94℃4min，一次循环；94℃1min，35℃1min，72℃2min，40次循环；72℃7min，一次循环。ISSR最佳反应体系为：DNA（20ng／μL），引物（1μmol／L），MgCl2（2.0mM），TaqDNA聚合酶1.5U，dNTPs（200μmol／L）；PCR循环程序：94℃4min，一次循环；94℃40s，48℃～56℃60s，72℃2min，30次循环；72℃7min，一次循环。 2．从120条RAPD随机引物中筛选出22条在样品间具多态性的引物，对鄂西柚种资源65份材料进行RAPD分析，扩增共产生207条RAPD标记带，其中多态性带104条，多态性百分率为50.2％；从50条ISSR引物中共筛选出13条在所有样品中均能产生清晰扩增带的ISSR引物，扩增共产生136条ISSR标记带，其中多态性带82条，多态性百分率为60.3％。检测效果表明，ISSR效果明显优于RAPD。 2．根据RAPD和ISSR结果聚类分析，表明鄂西柚种资源单株间遗传差异明显。根据DNA标记数据转化遗传距离矩阵所作UPGMA树系图表明，RAPD聚类结果和ISSR聚类结果均可将所有材料划分为3大类群，3大类群内聚集的柚类型间遗传差异比较大，分化明显。该地区内沙田柚存在较大差异，长寿沙田柚的几个类型和来自广东、广西的沙田柚类型聚类明显比较分散，其地区性差异显著。同时，研究表明鄂西本地区的一些沙田柚类型也产生了一定程度的遗传差异。 研究表明，RAPD和ISSR标记技术都能较好地反应各柚类型的遗传差异，适于进行遗传距离相对较近的柚种内各类型间的品系鉴定和遗传关系分析。同时文中还就RAPD和ISSR技术方法问题进行了讨论，并对鄂西柚种质资源保护提出了一些建议。