十味调脂方对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝组织PPARαmRNA表达影响的研究

目的:十味调脂方(柴胡、丹参、绞股蓝、水红花子、姜黄、首乌藤、生山楂、泽泻、决明子、茺蔚子)具有疏肝理气、泄浊消瘀的功效,为导师临床用于治疗非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的有效方剂,为进行深入研究,采用高脂饮食法复制大鼠NAFLD模型,并施加药物干预,观察本方对NAFLD大鼠血脂、肝功能、肝组织形态学及肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体mRNA(PPARαmRNA)表达的影响,探讨本方治疗NAFLD的可能作用机制。方法:将40只清洁级健康雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后,根据体重分层随机分为4个组:正常组(N)、模型组(M)、十味调脂方组(Z)、非诺贝特组(X),每组各10只。正常组大鼠给予常规饲料,其他各组均给予高脂饲料饲养。8周后,除正常组外,从其余各组中分别抽取1只大鼠处死,行肝组织病理学检查,确定造模是否成功。确定造模成功后,正常组与模型组均予生理盐水灌胃,各治疗组大鼠给予相应药物灌胃治疗,干预4周后处死所有大鼠,取血清及肝脏组织标本,采用2,4-二硝基苯肼法(比色法)检测血清中甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)含量的变化;应用色谱-可见分光光度法测定肝组织中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;采用苏木精-伊红染色法(HE)染色观察大鼠肝组织的病理形态变化;运用RT-PCR法检测大鼠肝脏中PPARαm RNA的表达水平。结果:1大鼠一般情况实验过程中,各组大鼠均未出现死亡,正常组大鼠精神良好,灵活好动,皮毛整洁光泽,体重逐渐增加;模型组初期体重明显增长,增长速度快于正常组,至7-8周体重增长较前缓慢,精神较萎靡,且喜卧懒动,食欲较前减退,皮毛凌乱,毛色晦暗,大便粘滞;各药物干预组大鼠在一定程度上均有上述改变,但介于正常组和模型组之间。2大鼠肝脏的病理学变化肉眼观察:正常组大鼠肝脏体积正常,色鲜红,表面光滑,边缘锐利,切面整齐;模型组大鼠肝脏体积明显增大,颜色偏黄,质软,包膜紧张,边缘变钝,切面油腻感;治疗组肝脏体积稍大,颜色与正常组接近,部分肝脏之切面稍有油腻感。光镜观察:正常组大鼠肝小叶结构完整,轮廓清晰,肝索排列整齐,以中央静脉为中心放射状排列,肝索与肝窦比例正常,肝细胞大小较一致,结构无异常,无脂滴及空泡,无炎性细胞浸润,细胞核正常、居中,胞质丰富。模型组大鼠肝小叶结构紊乱,肝索放射状排列消失,可见炎性细胞浸润;大部分肝细胞肿胀,胞浆内出现大量大小不等的脂滴空泡,呈中、重度度弥漫性大泡性脂肪变。中药组大鼠肝小叶结构较完整,轮廓清晰,肝细胞无明显肿胀,部分细胞内可见少量细小脂滴,未见明显炎性细胞浸润。西药组大鼠肝小叶结构稍紊乱,肝细胞轻度肿胀,胞浆内可见少量大小不等的脂滴,未见明显炎性细胞浸润。3大鼠血清和肝组织指标含量比较:3.1各组大鼠血清中tg、tc含量比较与正常组相比,模型组大鼠的血清tg、tc含量升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。与模型组相比,中药组与西药组血清tg、tc含量均明显降低,具有显著性差异(p<0.05)。与中药组相比,西药组血清tg、tc降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。3.2各组大鼠血清中alt、ast含量比较与正常组相比,模型组大鼠的血清alt、ast含量明显升高(p<0.05)差异具有统计学意义。与模型组相比,中药组与西药组大鼠血清alt、ast均明显降低,具有显著性差异(p<0.05)。与西药组相比,中药组血清alt、ast降低,但差异无统计学意义(p>0.05)。3.3各组大鼠肝脏组织中tg、tc含量比较与正常组相比,模型组大鼠肝脏组织中tg、tc含量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。与模型组相比,中药组与西药组大鼠肝脏组织中tg、tc含量均明显降低,具有显著性差异(p<0.05)。与西药组相比,中药组大鼠肝脏组织中tg、tc含量降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。4各组大鼠肝组织中PPARαm RNA表达水平比较与正常组相比,模型组大鼠肝脏组织中PPARαmRNA明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,中药组与西药组大鼠肝脏组织中PPARαmRNA表达水平均明显升高,具有显著性差异(P<0.05)。中药组大鼠肝脏组织中PPARαmRNA水平高于西药组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1十味调脂方能够明显改善非酒精性脂肪性肝病模型大鼠一般情况、肝脏组织形态学变化,是治疗非酒精性脂肪性肝病的有效方剂。2十味调脂方可以调控血清中TC、TG、AST、ALT及肝组织中TC、TG含量,以改善NAFLD肝脏脂质代谢紊乱和脂质异常沉积的病理状态。3十味调脂方能够上调肝组织PPARαm RNA的表达水平,可能是改善肝脏脂质代谢紊乱和减少脂质在肝细胞内沉积,以治疗非酒精性脂肪性肝病的重要作用机制。