口服丹参素钠临床前药代动力学及提高生物利用度策略研究

丹参来源于唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎,广泛用于治疗心脑血管疾病。丹参中的化学成分主要分为脂溶性成分和水溶性成分。水溶性成分中以丹参素的含量最高,化学名为D（+）-β-（3,4-二羟基苯基）-乳酸。丹参素具有良好的抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗心肌缺血及抗心律失常等保护心肌的作用。丹参素钠是丹参素的钠盐,分子式为C9H9O5Na,分子量为220。近年来,心脑血管疾病发病率逐年上升,严重威胁到人类的健康,而丹参素也因其安全性高,疗效显著越来越受到人们的青睐。但是生物利用度低,疗效不够稳定限制了丹参素口服制剂的开发,因此口服丹参素钠提高生物利用度研究势在必行。 本课题在建立超高速飞行时间质谱（UHPLC-QTOF-MS）测定大鼠血浆中丹参素钠的浓度的基础上,研究丹参素钠在大鼠体内的药代动力学,并且通过丹参素钠与吸收促进剂合用来达到提高丹参素钠的生物利用度的目的。研究主要包括三个部分。 一.血浆样品中丹参素钠分析方法的建立 研究目的:建立超高速飞行时间质谱（UHPLC-QTOF-MS）测定SD大鼠血浆中丹参素钠的浓度。研究方法:主要采用液液萃取的方法对血浆样品中进行预处理后进行UHPLC-QTOF-MS分析。分析柱为Agilent ZORBAX SB-C18 （100×2.1 mm, 3.5μm）;流动相为乙腈:水（含0.1%甲酸）=10:90;流速为0.3 ml/min;进样量为10μL;质谱条件:电喷雾化电离源ESI负离子检测,毛细管电压为4500V,雾化器为空气,50 psig,干燥气流速11L/min,温度为350℃。结果:丹参素钠在10.0～2000.0 ng/ml检测浓度范围内呈良好的线性关系（r>0.999）,最低定量限为10.0 ng/ml,绝对回收率在98.0～110.0%之间,高中低三中浓度的日内和日间RSD<10%。结论:该分析方法回收率高,干扰少,选择性好、灵敏度高、快速、简单、准确,适用于血浆样品中丹参素钠的含量测定以及临床前实验研究。 二.丹参素钠在SD大鼠体内的药代动力学研究 研究目的:采用上述建立的UHPLC-QTOF-MS测定SD大鼠血浆中丹参素钠的浓度,采用非房室模型推算药物动力学参数。研究方法:（1）SD大鼠单剂量静脉注射给药（15、30和60mg/kg）丹参素钠后,于给药前及给药后0、0.083、0.167、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h取血,用液液萃取的方法对血浆样品进行预处理,并且用上述建立的UHPLC-QTOF-MS法测定血浆中丹参素钠的浓度,根据所得的血药浓度-时间曲线,采用非房室模型推算药代动力学常数。（2）SD大鼠单次口服给药（30和180mg/kg）丹参素钠后,于给药前及给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h取血,用液液萃取的方法对血浆样品进行预处理,并且用上述建立的UHPLC-QTOF-MS法测定血浆中丹参素钠的浓度,根据所得的血药浓度-时间曲线,采用非房室模型推算药代动力学常数。（3）SD大鼠单剂量静脉注射给药30mg/kg于给药前及给药后0、0.03、0.08、0.17、0.33、0.67、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h取血。口服给药180mg/kg后,于给药前及给药后0.08、0.17、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h取血。上述建立的UHPLC-QTOF-MS法测定血浆中丹参素钠的浓度,根据所得的血药浓度-时间曲线,采用非房室模型推算药代动力学常数,计算绝对生物利用度。结果:SD大鼠单剂量静注给药丹参素钠15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg三个剂量组药代动力学药时曲线末端相消除半衰期（t1/2）分别为3.39h、2.51h、2.67h。AUC0∞分别为12.58mg×h/ml、34.35mg×h/ml和58.23mg×h/ml,AUC与给药剂量基本呈正相关,相关系数为0.987。MRT分别为0.46、0.41和0.28h。AUC与给药剂量基本呈正相关,相关系数为0.987。 SD大鼠口服给药后达峰时间均为1.5h。30和180mg/kg两个剂量组的平均达峰浓度分别为1.39μg.h/ml和8.76μg.h/ml,消除半衰期分别为1.24h和2.34h。药时曲线下面积AUC分别为3.99μg.h/ml和27.37μg.h/ml。MRT分别为2.36和2.97h。SD大鼠静脉注射给药丹参素钠30mg/kg和口服给药180mg/kg两个剂量组AUC0∞分别为60.36±16.14mg×h/ml、27.37±4.54mg×h/ml,绝对生物利用度为9.84%。生物利用度结果表明,该药作为口服制剂,存在着生物利用度低吸收比较差的问题,因此高生物利用度丹参素钠口服制剂研究势在必行。 三.口服丹参素钠提高生物利用度策略研究 研究目的:通过丹参素钠与冰片或者胆酸钠合用,比较合用组和对照组的药代动力学参数,期望能达到提高其生物利用度的目的。研究方法:（1）SD大鼠12只随机分为两组,对照组口服给药丹参素钠（30mg/kg）,实验组口服给药丹参素钠（30mg/kg）和冰片（60mg/kg）,比较对照组和合用组组生物利用度变化情况。（2）SD大鼠12只随机分为两组,对照组口服给药丹参素钠（30mg/kg）,实验组口服给药丹参素钠（30mg/kg）和胆酸钠（150mg/kg）,比较对照组和加胆酸钠组生物利用度变化情况。结果:（1）丹参素钠与冰片合用,药代动力学参数Cmax和药时曲线下面积AUC没有明显变化,生物利用度没有提高。（2）加胆酸钠组能使能使得丹参素钠的Cmax由1.39±0.07μg/ml提高至2.10±0.12μg/ml , AUC0∞由3.89±0.13μg.h/ml提高至5.85±0.24μg.h/ml,生物利用度有了显著提高。结论:丹参素钠与冰片合用,是参考复方丹参片中丹参与冰片配伍,结果不能达到预期效果,生物利用度没有得到提高,原因将进行进一步探讨;丹参素钠与胆酸钠合用,是期望能通过加入吸收促进剂促进其胃肠道吸收,从而提高其生物利用度。结果丹参素钠实验组Cmax和AUC0∞均提高了50%左右,生物利用度得到了明显的提高。此研究结果初步改善了丹参素钠口服制剂生物利用度低的问题,为进一步提高丹参素钠口服类制剂的生物利用度提供了思路。