洋葱胚状体诱导及再生体系的建立

本文对洋葱花蕾和成熟胚的组织培养技术进行了研究，并对形态发生的细胞学作了分析，结果如下： 洋葱花蕾是诱导愈伤组织的良好材料，添加外源激素后，在以MS和BDS培养基为基本培养基均可得到愈伤组织，且激素的作用大小顺序及最佳浓度表现了极大的相似性。在MS培养基上作用大小顺序是2，4-D＞BA＞KT＞NAA，最佳激素配比为2，4-D2.0mgl-1+BA2.0mgl-1+KT0.5mgl-1+NAA0.5mgl-1，最高诱导率为67.81％；在BDS培养基上，这四种外源激素作用大顺序是2，4-D＞BA＞NAA＞KT，最佳激素配比为2，4-D2.0mgl-1+BA2.0mgl-1+KT1.0mgl-1+NAA0.5mgl-1，最高诱导率为41.11％。生长素2，4-D在花蕾的脱分化作用中，居主导地位，细胞分裂素BA作用远大于KT。试验发现MS培养基更适于诱导愈伤组织，在相同的外源激素配比下，具有较高的诱导率。但BDS培养基上的愈伤组织生长势更佳。幼蕾接种后6d见愈伤组织发生，愈伤组织为瘤状突起，表面粗糙、凹凸不平。呈黄色、绿色、或黄绿色。花蕾的发育时期是影响愈伤组织发生的重要因素。不同基因型对外源激素敏感性差异显著。花蕾直径大于3mm时愈伤组织发生率极低，仅为13.2％。蔗糖浓度3％最佳，但暗培养、弱光培养、及4℃低温处理均不利于愈伤组织发生。 生长素减半，细胞分裂素加倍利于愈伤组织保持并向胚性转化。生长素浓度过高，愈伤组织有生根现象。得到胚性愈伤组织后，去掉2.4-D，并代以低浓度的NAA(0-0.2mgl-1)，获得胚状体。切片观察有球形胚、盾片形胚、和心形胚。胚状体在不添加任何外源激素的MS0上萌发率20％。继代培养时间对胚状体萌发影响显著，继代150d时，萌发率较高，210d后，基本丧失再生能力。 成熟的胚在附加生长素2，4-D(0-2.0mgl-1)、NAA(0-2.0mgl-1)和BA(0-2.0mgl-1)的MS培养基上均能得到愈伤组织，在2，4-D1.0mgl-1+BA2.0 洋葱胚状体诱导及再主体系的建立 m护 生长的幼苗鳞茎盘愈伤化最佳，长势最旺。在芽分化培养基上，MS ＋NAAO．lttigl’＋BAZ刀mgl－’产生的再生苗多且长势健壮。试验表明，分化 培养基必须有一定的细胞分裂素才能产生芽的分化。 再生植株在无激素的培养基上生长良好。生根后，驯化移栽，得到 再生苗，对16株幼蕾再生植株进行染色体倍性鉴定，表明再生植株均为 二倍体C叫)，没有染色体变异。