香菇多糖注射制剂质量标准的系统化研究

香菇多糖是菌类多糖中的一种。1985年日本最先批准香菇多糖作为抗癌新药上市，主要用于恶性肿瘤的辅助治疗。研究表明香菇多糖在抗胃癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌等方面有良好的疗效，能够延长肿瘤患者的存活时间。近年来发现香菇多糖还有抗病毒和抗感染的功能。1995年，我国国产的香菇多糖注射制剂批准进入临床应用。现在市场上销售的国产香菇多糖注射制剂包括注射液与注射用无菌粉末两种。香菇多糖注射液全国有1个企业生产，2个批准文号（分别为中药与化药注射液），执行标准为WS3-149(Z-29)-95(Z)和WS-1071（X-806）-2002；注射用香菇多糖，全国共4个企业生产、4个批准文号，执行标准为WS1-（X-152）-2004Z。原料药名称相同生产的注射剂却执行不同的标准，有的按照中药管理，有的按照化药管理，可控性差，加之现行的香菇多糖注射制剂质量标准已经执行多年，检查项目较少，部分分析方法陈旧，因此有必要通过改进检验方法和增加检验项目，建立更加完善的质量标准，确保安全、有效、稳定、可控的香菇多糖注射制剂用于临床。 本文根据《中国药典》和相关文献，以色谱技术为主要研究手段，对香菇多糖注射制剂的质量标准进行系统化研究。 一、现行香菇多糖注射制剂质量标准中含量测定方法的改进 现行的质量标准中，香菇多糖注射液（中药）和注射用香菇多糖的含量测定方法是滴定法。本文采用操作简便，误差更小的蒽酮比色法作为香菇多糖注射液（中药）和注射用香菇多糖的含量测定方法；本文还研究了用HPLC-RID来测定制剂中香菇多糖的含量，该法虽然可以避免香菇多糖注射制剂中辅料的干扰，但因现阶段没有香菇多糖的标准品，使用葡聚糖作为标准品来进行含量测定有一定误差。 二、现行香菇多糖注射制剂质量标准外项目的研究 （1）现行的质量标准中缺少对香菇多糖分子量的检查项目，而研究表明[1,2]，香菇多糖的抗肿瘤活性与其分子量密切相关。本文采用HPLC-RID对香菇多糖注射制剂的分子量分布进行测定，结果表明，香菇多糖注射制剂的分子量分布差别很大。 （2）多糖的单糖组成分析是研究多糖结构、活性及构效关系的一项重要内容。本文采用HPLC-RID测定香菇多糖水解后的单糖组成，结果表明，不同制剂的香菇多糖单糖组成差别较大。 （3）根据《中国药典》2010版二部附录ⅧP，香菇多糖原料的生产纯化过程中用到的三氯甲烷（第二类溶剂）、正丁醇（第三类溶剂）和乙醇（第三类溶剂）残留量超标会对人体造成危害。本文采用GC对香菇多糖注射制剂中溶剂残留的含量进行检测，结果表明，香菇多糖注射制剂中未检出残留溶剂。 （4）苯甲醇常在注射液中用作止痛剂和防腐剂，但如果摄入过量有溶血等副作用，会对人体造成危害。香菇多糖注射制剂中只有香菇多糖注射液（中药）处方中含有苯甲醇。本文采用HPLC-DAD测定了香菇多糖注射制剂中苯甲醇的含量，结果表明，只有香菇多糖注射液（中药）中检测到苯甲醇并确定了含量限度范围。 （5）香菇多糖是由葡萄糖等单糖聚合而成的多糖，在水中难溶，注射液生产时常需加入增溶剂。5-HMF是葡萄糖等单糖化合物在制备过程中经高压灭菌后分解产生的一个醛类化合物，会对人体横纹肌和内脏有损害；吐温80是注射液常用的增溶剂，但具有很强的刺激性、溶血性和致敏性，本文采用HPLC-UV对香菇多糖注射制剂中5-HMF、吐温80进行检测，结果表明，香菇多糖注射制剂中未检测到5-HMF和吐温80。 （6）根据《中国药典》2010年版（附录ⅨG），处方中添加了渗透压调节剂的制剂，均应控制其渗透压摩尔浓度。本文采用冰点下降法对香菇多糖注射制剂的摩尔渗透压进行测定，结果显示，不同香菇多糖注射制剂的摩尔渗透压有差异。 （7）研究表明，重金属及有害元素摄入过多对人有危害，而药品原材料、辅料及生产设备中的重金属元素可能进入到注射制剂中，因此有必要限制对制剂的重金属元素的含量。本文采用ICP-MS测定香菇多糖注射制剂中多种金属元素的含量，并制定了香菇多糖注射制剂中的重金属及有害元素含量限度标准。 三、腹腔内注射香菇多糖注射制剂对小鼠免疫调节功能的影响 单核巨噬细胞系统在免疫调节中起关键作用，对机体内异体颗粒、病原体及肿瘤细胞等具有强大而迅速的非特异性吞噬廓清能力，而研究发现香菇多糖的免疫调节功能与分子量大小有关，因此测定单核巨噬细胞系统功能可以表征香菇多糖的药理活性。本文通过比较小鼠给药后碳粒廓清功能强弱，反映了香菇多糖注射制剂对单核巨噬细胞功能的影响大小，结果显示，分子量88万Da的注射用香菇多糖的免疫调节功能强于分子量32万Da的香菇多糖注射液（中药、化药）。 根据以上研究结果，制定系统化的香菇多糖注射制剂质量标准草案，确保临床上用到安全、有效、稳定、可控的香菇多糖注射制剂。