甘草道地性的物质基础和评判指标体系研究

中药道地性是传统中医药学实践经验的科学总结,是中医药理论在长期实践过程中总结出来的对药材质量控制的客观判别标准。道地药材的质量特征及其形成机理是当前中药材道地性研究的核心内容,采用科学、完整的理论体系和方法来揭示中药材道地性的科学内涵已经成为道地药材研究的关键。因此,本文以甘草为研究材料,采用本草学、方志学、史学等方法研究甘草道地性的历史演变过程,以揭示甘草道地性的演化规律。利用多指标成分含量测定和指纹图谱方法,比较不同性状、产地、物种的甘草化学特征的差异,揭示甘草道地性物质基础内涵,进而探讨科学的甘草道地性的评价指标体系。主要研究结果如下: 1不同历史时期甘草道地产区的记述有所不同,而记述的物种应为甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)。众多本草和史料记载,甘肃、宁夏、内蒙、陕西、山西等省区的一些地区都曾经是甘草的道地产区。道地性状的描述不同文献略有出入,然以粗大、表面红棕色、横纹、质地坚实、断面黄白、粉性足者为佳。 2采用大孔树脂技术、高速逆流色谱技术,结合凝胶色谱、反相色谱方法制备了甘草中的生物活性成分。得到甘草酸、甘草苷、甘草查儿酮A、异甘草素等成分,纯度达到98%以上。建立了利用高效液相指纹图谱和高分离度快速液相色谱-质谱联用技术(RRLC-MS/MS),同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、查尔酮A、异甘草素、甘草次酸、芒柄花素等成分的含量测定方法。 3发现不同道地性状甘草的生物活性成分含量存在一定差别,具有色棕红、断面黄色、粉性强等特征的样品,甘草酸、甘草苷和异甘草素含量较高,且具有一定规律性。由此提出,甘草酸、甘草苷和异甘草素等可以作为体现甘草道地性的主要化学物质。 4不同产地甘草在道地性状和活性成分含量方面存在明显的差异,其指纹图谱也各具特征,新疆与其他地区甘草之间差异较大,指纹图谱相似度值为0.400-0.700之间,明显小于其他产地甘草。产地条件是甘草道地性特征形成的重要因素。 5甘草、光果甘草和胀果甘草之间,主要活性成分含量存在明显差异,特别在甘草苷和甘草查尔酮的含量上差异显著,可以作为区分三种甘草的指标性成分;三者的化学指纹图谱也具有较为明显的不同,除上述两种成分外,还存在其他不同的色谱峰。生物物种在甘草道地性特征形成上也具有较大作用。 6初步提出了甘草道地性评判指标体系,断面黄白色、粉性足都是道地性状的主要指标,横纹、红棕指标特征因产地而异;传统道地产区(甘肃等)甘草质量较好,可以作为甘草道地性产地指标。甘草酸、甘草苷、异甘草素是甘草道地性的主要物质基础,以其含量为指标可以建立甘草道地性评价的现代化学指标体系;利用指纹图谱能够准确的区别三种不同甘草,主要表现为甘草苷色谱峰以及查尔酮类色谱峰的差异。 本论文的研究特色和创新点为: (1)从文献资料、传统性状和现代化学成分特征等多角度、多层次研究了甘草道地性的性状特征、物质基础及其影响因素,揭示了甘草道地性的科学内涵。 (2)建立了同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、查尔酮A、异甘草素、甘草次酸、芒柄花素含量的HPLC-DAD和RRLC-MS/MS测定方法。 (3)通过对不同道地性状、道地产区、生物物种甘草的生物活性成分和化学指纹图谱分析,发现了表征甘草道地性的主要物质基础,初步建立了甘草道地性系统评价的现代化学方法和技术体系。