四逆散水提物体外成分分析与血中移行成分认定

中药复方四逆散水煎物在改善睡眠、提高睡眠质量方面具有独特的疗效,为阐明其改善睡眠作用药效物质基础,本课题以四逆散水煎物为研究对象,以中药指纹图谱技术和血清药物化学方法为主要研究手段,首先在240nm、210nm波长下建立了四逆散水煎物的HPLC指纹图谱,采用相关系数法评价了指纹图谱的相似度,在同条件下建立了四逆散水煎物中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸、甘草次酸的含量测定方法,以此为四逆散水煎物的制备提供质控标准;在此基础上,进行了四逆散拆方煎煮化学成分变化分析,以说明四逆散在拆方煎煮过程中的成分变化,经过对比发现,四逆散在全方煎煮过程中产生了各单味药中所不含有的新成分,不同煎煮物中主要成分的含量测定结果表明,四逆散中各单味药中成分之间存在明显的相互增溶作用。在确定了甲醇法制备血清样品和给药5h为最佳采血时间后,建立了四逆散血清指纹图谱,确定了8个共有峰;同时对血中移行成分来源进行了认定,其中1号、2号成分均来源于枳实,属枳实及四逆散水煎物中可直接入血成分,3号成分为白芍的体内代谢转化物,4号成分为甘草的体内代谢转化物,5号成分为枳实体内代谢转化物,6号成分属甘草及四逆散水煎物可直接入血成分,7号成分为柴胡经配伍后入血的成分,8号成分为枳实与其它药物配伍经体内代谢所产生的新物质;研究中分析了连续给药7天与单次给药后血中移行成分的动态变化,对比后发现,四逆散水煎物经过连续给药7d后血清中成分比一次给药5h血清中多出现α、β、γ、δ、ε、θ6个成分,其中γ成分为芍药苷,θ成分为甘草次酸。最后比较了给药前后脑脊液中成分的变化,分析发现,脑脊液中除戊巴比妥钠成分外,并无血中移行成分的进入,给药后大鼠脑脊液中的内源性物质分泌显著增多。上述研究结果,为四逆散改善睡眠作用机制的阐明及深层次的开发研究奠定了基础。