POLY(I:C)和LPS对表达TLR3和TLR4的人骨髓间充质干细胞增殖和分泌功能的影响

目的研究健康供体骨髓源性间充质干细胞(BM-MSC)中Toll样受体(TLRs)的表达特征;研究POLY(I:C)(TLR3激活剂)与脂多糖(LPS,TLR4激活剂)分别对BM-MSC增殖的影响;研究POLY(I:C)与LPS分别对BM-MSC分泌IL-6、IL-10和IL-12的影响。 方法Ficoll法分离培养健康供体的BM-MSC;用流式细胞仪(FCM)检测BM-MSC中CD34、CD45、HLA-DR、CD44和CD71的表达;免疫细胞化学法检测爬片BM-MSC细胞中CD71的表达;半定量RT-PCR法检测TLR1-10mRNA的表达;MTT法检测POLY(I:C)和LPS对BM-MSC增殖的影响;EHSA法检测POLY(I:C)、LPS对BM-MSC分泌IL-6、IL-10和IL-12的影响。 结果FCM发现体外分离培养的BM-MSC中CD34、CD45和HLA-DR表达呈阴性,CD44和CD71表达呈阳性;爬片BM-MSC细胞中CD71的表达呈阳性。BM-MSC中TLR1-10 mRNA均有表达,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9均高表达,TLR1、TLR5、TLR6、TLR10均低表达,BM-MSC中有较高水平的TLR3和TLR4表达。体外培养第5天时,各浓度POLY(I:C)组存活的BM-MSC细胞数均少于10%FBS组(分别p=0.000),而多于DMEM组(分别p＜0.05),浓度(concentration,Conc)和存活细胞数(viable count,VC)间存在半对数直线相关关系(r=-0.998,p=0.039)。体外培养第7天时,中浓度和高浓度LPS组存活细胞数均少于10%FBS组(p=0.013,p=0.003),而多于DMEM组(p=0.001,p=0.002)。与对照组相比,用不同剂量的POLY(I:C)刺激时,BM-MSC分泌IL-6明显增多(P=0.000,P=0.021),且25ug╱mL组明显高于2.5ug╱mL组(P=0.000);但分泌IL-10明显减少(P=0.000),且250ug╱mL组明显低于25ug/mL组;而对IL-12的分泌无明显影响。与对照组相比,用不同剂量的LPS刺激时,BM-MSC分泌IL-6明显增多(P=0.000),但各剂量组间无显著性差异(P＞0.05),而对IL-12和10的分泌无明显影响。 结论从健康供体骨髓中分离培养的BM-MSC表达不同水平的TLR1-10 mRNA。BM-MSC中TLR3和TLR4的表达是功能性的。