双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制

消化道中定植有大量菌群,消化道上皮细胞与这些菌群直接接触,是肠道粘膜免疫的第一道防线,其分泌的抗菌肽分子在维持肠道微生态平衡、抵抗病原菌感染中占有重要地位。人β-防御素-2(hBD-2)是一重要的抗菌肽分子,广泛表达于皮肤、呼吸道、消化道、泌尿生殖道等粘膜上皮细胞中,具有重要的抗感染功能。hBD-2具有诱导表达的特点,通常情况下肠道上皮细胞不表达hBD-2,但在受到致病因子刺激时,hBD-2的表达量迅速提高,进而发挥粘膜保护功能。 以往的研究显示病原菌如肠炎性沙门氏菌,侵袭性大肠杆菌等能够诱导人肠道上皮细胞hBD-2表达,但是益生菌与抗菌肽之间的关系还没有相关研究,而且hBD-2诱导表达的调控及其信号转导机制十分复杂,目前尚不完全清楚。双歧杆菌作为人体主要益生菌之一,参与了宿主的消化、营养、代谢、吸收、免疫及抗感染过程。因此通过探讨双歧杆菌与hBD-2表达之间的关系,寻找诱导hBD-2基因表达的有效刺激因子,不仅能够通过提高粘膜局部hBD-2浓度而达到杀灭病原菌的目的,而且有助于在分子水平上揭示机体抗感染免疫防御机制。 本项研究目的是检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分,进一步探讨其受体及其胞内信号传导通路。 首先,我们研究了双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分。厌氧培养长双歧杆菌,采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取方法获得双歧杆菌胞壁蛋白质成份,分别利用活菌,热灭活全菌,全