Aβ对大鼠海马神经元突触后膜AMPA受体亚基的作用及其分子机制

第一部分Aβ25-35对大鼠原代培养海马神经元AMPA受体亚基表达的影响 目的:探讨与AD发生密切相关的β淀粉样蛋白（Aβ）对原代培养大鼠海马神经元AMPA受体亚基的影响。 方法:将原代培养的大鼠海马神经元随机分为正常对照组和模型组。其中模型组给予25μM Aβ25-35孵育24小时,分别提取细胞总蛋白和膜蛋白,采用western blotting结合免疫荧光双标技术,观察各组神经元总蛋白和膜蛋白中AMPA受体的变化。 结果:给予Aβ25-35孵育24小时后,总蛋白中GluR1和GluR2亚基含量较正常组细胞明显下降,GluR3亚基含量略有下降;同时膜蛋白中GluR1和GluR2含量亦有所下降;分析膜蛋白/总蛋白的比值发现,Aβ25-35可使GluR2在神经元膜上表达减少,相对增加GluR1亚基在膜上的表达。 结论:Aβ25-35可使原代培养大鼠海马神经元总蛋白和膜蛋白中AMPA受体三种亚基GluR1、GluR2、GluR3含量均下降,同时GluR2膜上表达减少,相对增加GluR1膜上表达,提示Aβ25-35可相对促进不含GluR2的AMPA受体转运至神经元膜表面。 第二部分Aβ25-35影响大鼠原代海马神经元AMPA受体亚基表达的机制 目的:探讨网格蛋白介导的AMPA受体内化在Aβ25-35所致的AMPA受体GluR2亚基在细胞膜上表达减少中的作用。 方法:采用预孵育高渗蔗糖（0.45 M）20分钟后,再给予Aβ25-35孵育24小时,然后提取细胞膜蛋白进行western blotting,观察各组细胞膜上GluR2亚基含量的变化。 结果:预孵育高渗蔗糖（0.45M）20分钟,可阻止Aβ25-35导致的细胞膜蛋白中GluR2的含量下降。 结论:由于高渗蔗糖可干扰网格蛋白,因此western blotting实验结果提示,Aβ25-35下调细胞膜AMPA受体的GluR2亚基表达,该作用可能与网格蛋白介导的AMPA受体内化途径有关。