微生物发酵转化黄芩的研究

本文进行霉菌发酵转化黄芩的实验研究，采用了添加黄芩苷的改良PDA平板筛选菌株，对发酵条件、转化机理和产物提纯与分析等方面进行了研究。该方法具有底物特异性，条件易控，高效灵敏的优点，通过该方法既可获得增效黄芩炮制品，可提取纯品黄芩素，实现了黄芩二次开发和利用。 采用平板显色法筛选得一株产β-葡萄糖醛酸酶的黑曲霉菌株HQ-10，通过HPLC检测黑曲霉HQ-10与中药黄芩的共发酵产物，证实了HQ-10将黄芩苷发酵转化为黄芩素的作用。 发酵优化试验考察了培养基碳源、氮源、无机盐，发酵条件转速、装量、温度、料水比、pH值等多因素对发酵转化黄芩过程的影响作用，并最终得出最适宜发酵条件：料水比1∶10；初始pH自然；温度28-30℃；转速200rpm；时间5-6d，主要成分黄芩苷转化率达94.9％。 发酵产物采用大孔吸附树脂的先进分离技术与复杂系统优化技术、化学提取法相结合，优化得便利简捷的树脂分离纯化工艺，最优化配比为采用天津海光D-101树脂，上柱样pH3.3，上柱速度8BV／h，上柱发酵液浓度1.15mg／g，加盐浓度6.4％，50％乙醇洗脱，洗脱速度5BV／h，洗脱pH5。吸附率达66.15mg／g，洗脱率34.5％，纯化率80％；柱分离得产物纯品，经核磁共振、红外、质谱、紫外等多种仪器检测确定为黄芩素(5，6，7-三羟基黄酮)。 通过抗炎、镇痛等药效试验初步证明发酵样品较未发酵样品有明显提高，P值基本＜0.05，提高了药材的利用效率和疾病治疗的增效作用。