富硒灵芝提取物工艺及抗肿瘤效果的研究

硒是人体必需的微量元素之一,参与人体许多组织中的重要代谢,与人类的疾病,特别是与目前严重影响人类健康的肿瘤、心血管疾病等有着密切关系。灵芝自古被誉为延年益寿之佳品,且具有良好的富集微量元素的作用。富硒灵芝产品,能够融合食用菌与硒功效于一体,有极大的实用价值。对于富硒灵芝中有效成分提取并进行抑瘤效果的研究,也可以为富硒灵芝产品的开发提供理论依据。 本论文以液体发酵培养的富硒灵芝为实验原料,对其中不同溶解特性的富硒蛋白进行了体外抗氧化研究,挑选其中抗氧化活性最强的水溶性蛋白进行了提取工艺的优化,通过动物实验考察了其抑瘤效果。 首先,分别用水、乙醇和碱溶液对富硒灵芝菌丝体进行提取得到水溶性、碱溶性和醇溶性三种富硒灵芝蛋白并进行检测后发现,与另外两种蛋白相比,水溶性蛋白具有最高的硒含量。同时,对三种蛋白体外抗氧化能力进行研究后发现,水溶性蛋白具有最高的还原力、最强的清除自由基和抗脂质体过氧化的能力,三种蛋白中硒含量与其抗氧化能力存在一定的量效关系。 其次,对水溶性蛋白的提取工艺进行了系统的研究。首先从单因素实验出发对各实验参数进行了选择,得出提取工艺为:提取温度60℃,液料比40:1,提取时间8h,提取次数3次。接着在单因素实验基础上进行了四因素三水平的正交实验,根据正交实验的结果得出了提取的最佳条件为:9小时、pH9.0、液料比35:1、温度60℃,此种条件下水溶性蛋白提取率可达到51.56%,蛋白中硒含量为533μg/g。 最后的体内实验主要是通过建立小鼠H22肝癌移植性肿瘤模型考察了水溶性硒蛋白的抗肝癌作用。通过计算抑瘤率、免疫指数及检测荷瘤小鼠肝脏匀浆中的MDA和H2O2含量及SOD、GSH-Px酶的活力等来评价富硒蛋白的药效。结果显示,水溶性富硒蛋白对小鼠肝癌H22有一定的抑制作用,其中高剂量的抑瘤率可达到41.96%;可提高小鼠体重,降低小鼠体内MDA和H2O2含量并提高小鼠体内SOD、GSH-Px酶的活力。同时从病理切片可以看出,富硒蛋白高剂量组可使肿瘤细胞出现大片的凋亡。