重楼皂苷抗乳腺癌及免疫调节作用研究

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一,目前乳腺癌的治疗方法通常有手术治疗、放射治疗、内分泌治疗、化学药物治疗、免疫治疗及中医中药治疗等。近年来放疗、化疗发展迅速,手术方法不断改进,使患者的生存质量和预后有了很大的改善。其中化疗是癌症治疗中最常用的方法之一,但是单独化疗却很难达到令人满意的治疗效果。一般认为辅助化疗应予术后早期应用,联合化疗的效果优于单药化疗。因此寻找一种防治乳腺癌的高效低毒药物是目前研究的热点。 重楼作为我国传统中药,具有退烧、解毒、消肿、镇痛、止血等作用。本研究采用乙醇提取后正丁醇萃取方法提取重楼皂苷,研究了其在体内和体外对MCF-7人乳腺癌细胞株的抑制作用,并深入研究了其抗癌机理,获得如下结果。 在离体试验中,RPS对MCF-7人乳腺癌细胞株呈明显的生长抑制性,并有显著剂量依赖性,其IC50为71.2±2.3μg/mL。通过Annexin V-FITC/PI双染法对RPS处理的MCF-7人乳腺癌细胞进行细胞凋亡检测发现,随着RPS浓度的提高,早期凋亡细胞明显增加。对MCF-7人乳腺癌细胞线粒体膜电位进行检测,发现随着RPS浓度升高,线粒体膜电位逐渐降低,说明此时细胞已接收到凋亡信号,开始启动凋亡程序。用Western Blot手段对MCF-7人乳腺癌细胞内各凋亡相关因子进行检测,结果显示同对照组相比,随着RPS浓度增加,活化的PARP、Caspase-3和Caspase-9含量有所提高,而Bax/Bcl-2的比值显著上升（P<0.05）,细胞质内细胞色素C的含量也有明显提高。结果表明随着RPS浓度增加,细胞开始执行线粒体介导的细胞凋亡途径,主要包括线粒体膜电位的降低,Bax/Bcl-2比率的提高,线粒体细胞色素C的释放,PARP的活化以及Caspase级联反应的激活。 荷瘤裸鼠给予高、低剂量的RPS灌胃14 d后,其肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤抑制率分别为43.14%和38.90%,且对肝脏和肾脏无明显毒性。 同对照组相比,RPS高、低剂量处理均可显著提高荷瘤裸鼠的胸腺指数（P<0.01）,但是对脾脏组织则无明显保护作用。 通过对荷瘤裸鼠血清相关细胞因子测定,荷瘤裸鼠血清IFN-γ和IL-2水平均显著升高,IL-4水平显著降低（P<0.05）,从而使机体内Th1/Th2平衡向Th1偏移;同时,RPS处理可降低血清中TNF-α水平,从而使肿瘤细胞失去生长条件,最终得以抑制肿瘤生长。 RPS处理可显著提高荷瘤裸鼠血清总抗氧化能力（T-AOC）水平（P<0.01）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）水平（P<0.05）,显著降低血清丙二醛（MDA）水平（P<0.05）。对荷瘤裸鼠肝脏、肾脏进行分析发现,组织中T-AOC和T-SOD水平都有显著提高（P<0.05）,但是对谷胱甘肽还原酶（GR）水平无显著影响（P>0.05）。 本文以Balb/c荷瘤裸鼠和MCF-7人乳腺癌细胞株为试验材料,通过体内外试验,运用HE染色法、ELISA法、MTT法、流式细胞术和Western Blot技术等方法对肿瘤相关蛋白、细胞因子、肿瘤组织病理结构和细胞凋亡等参数进行分析,系统研究了RPS抗乳腺的作用及其内在机理,为RPS治疗乳腺癌提供了一定的科学依据和理论基础。