芍药苷在正常大鼠体内的多剂量药物动力学研究

白芍总苷(total glucosides of paeony, TGP)是已经上市用于治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的药物,具有明显的抗炎、镇痛、免疫调节等作用。虽然TGP治疗RA是有效的,安全的,但TGP仍存在一些不足,包括起效较慢、疗效个体差异大、主要作用机制和作用靶点以及药动学特点不清楚等。芍药苷(paeoniflorin, Pae)是TGP主要有效成分,研究表明Pae同样具有良好的抗炎免疫调节作用。对Pae前期的一些药动学研究表明,Pae血药浓度较低,一般情况下HPLC方法难以检测,因此建立灵敏度更低、专属性更强的生物样品分析方法将更加有利于探讨Pae的药动学过程。 目的:建立生物样本中Pae定量分析的方法,探讨Pae在大鼠体内的多剂量药动学过程及特点。 方法:采用四级杆质谱仪进行选择反应检测(SRM),电喷雾离子源,进行色谱分析。考察3个剂量芍药苷灌胃给药后,大鼠体内的药物动力学特征。血浆样品用乙酸乙酯萃取,氮气吹干后用甲醇溶解,取30μl上清液进样;分别测定正常大鼠灌胃给予Pae后各个时间点的血药浓度和组织浓度,将血药浓度-时间(C-t)数据经DAS ver 2.0软件拟合,进行房室模型判别及相关药动学参数计算。 结果: 1.生物样本中Pae定量分析的方法的建立 建立可靠的生物样品测定方法是本课题研究的基础。我们通过特异性、灵敏度、精密度、稳定性等考察,在检测过程中进行方法学质控,制备随行标准曲线计算Pae的浓度。色谱条件:色谱柱为岛津ODS (250mm×2.0mm,3μm),流动相为甲醇:0.1%甲酸溶液(70:30)。采用四级杆质谱仪进行选择反应检测,电喷雾离子源。生物样品预处理采用乙酸乙酯液-液萃取法。通过该测定方法,Pae峰与杂质峰可完全分离,具有较高的专属性,生物样品中杂质不干扰样品测定。血浆中最低检测限为5ng/ml,线性范围:5-5000 ng/ml;组织中最低检测限为1ng/ml,线性范围:1-2000 ng/ml;生物样品相对回收率>90%,日内和日间RSD均<15.0%,样品在室温放置、冷冻储存、反复冻融条件下基本稳定。该法符合生物样品分析要求。 2. Pae在大鼠体内的药动学 正常大鼠分别多次灌胃给予Pae,LC-MS方法检测血浆中药物浓度。正常大鼠多次灌胃给予Pae25、50、100mg/kg后,Pae体内过程符合二室模型。从第4天Pae血药浓度已基本稳定,表明已达到稳态,达稳态后其主要药动学参数分别为:分布相半衰期(T1/2α, h)为1.138±0.370、1.869±0.933、1.571±0.638;消除相半衰期(T1/2β, h)为2.242±0.552、2.598±0.904、2.169±0.603;清除率(CL/F, L·h-1·kg-1)为8.744±1.027、8.390±2.209、4.867±1.110;达峰时间(Tmax, h)为3.400±0.548、4.000±0.707、3.800±0.447;峰浓度(Cmax,μg·L-1)为80.407±12.21、184.136±73.359、358.902±188.463;平均稳态血药浓度(Cav,μg/L)为23.316±2.855、51.271±22.694、86.658±21.613波动系数(DF)为3.174±0.2、3.364±0.533、3.715±1.093药时曲线下面积(AUCss,μg·h·L-1)为559.567±68.531、1230.510±544.655、2079.780±518.733;药时曲线下面积(AUC(0-∞),μg·h·L-1)为578.600±72.180、1299.254±512.031、2164.384±610.170; 3.Pae灌胃给予50mg/kg后,Pae在各主要组织中均有分布,其中以肝、肾的药物浓度最高,各组织中药物消除较快,在给药后4h,药物消除近一半,在9h几乎完全消除,表明该药物经口服给药后不易在体内产生蓄积。 结论: 1.在生物样品中建立了稳定、可靠的Pae LC-MS分析方法; 2.对Pae在大鼠体内的多剂量药动学过程进行研究,探讨Pae在大鼠体内的药动学特征。灌胃给予Pae25、50、100mg/kg后,吸收、消除较快,具有线性动力学特征。Pae灌胃给予50 mg/kg后,Pae在各主要组织中均有分布,Pae不易在体内产生蓄积。