兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路干预作用的实验研究

目的:本实验通过观察兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠一般情况、疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织中δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)、β-arrestin1、Bcl-2m RNA表达的影响,探讨DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路在UC发病机制中的作用及该方通过干预此通路治疗UC的作用机理。方法:将60只8周龄Wistar大鼠(♂),随机分为6组,每组10只,分别为空白组(NG)、模型组(MG)、兰茵凤扬化浊解毒方大剂量组(HDG)、兰茵凤扬化浊解毒方中剂量组(MDG)、兰茵凤扬化浊解毒方小剂量组(LDG)、柳氮磺胺嘧啶组(SASP)。空白组正常喂养,其余五组均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(trini-trobenzenesul-fonic acid,TNBS)/乙醇联合造模法(TNBS/乙醇)诱导UC动物模型。造模成功后第4天,空白组正常喂养,模型组予生理盐水灌胃,余各组给予相应药物灌胃,均灌胃2周,观察大鼠精神状态、体重、大便性状等一般情况和结肠黏膜大体观及组织病理学改变。采用实时定量逆转录(RT-PCR)方法检测各组大鼠结肠组织中DOR、β-arrestin1及Bcl-2m RNA的表达情况并分析兰茵凤扬化浊解毒方对这些指标表达情况的影响。结果:1一般情况与DAI评分同NG相比,造模后各组大鼠均出现精神萎靡不振、活动量减少、反应力下降、被毛偏黄少泽,进食量减少,体重减轻,稀溏便或黏液血便等情况。药物治疗14天后,各组大鼠一般情况均有所好转,HDG同NG接近,大鼠的精神状态、活动量及大便性状等基本恢复正常。MDG和SASP好转程度均低于HDG,但其二者无明显区别,LDG低于MDG和SASP,但高于MG,MG恢复最差。DAI评分中:HDG(0.37±0.35)、MDG(0.81±0.29)、LDG(1.56±0.41)、SASP(0.78±0.29)与MG(2.46±0.43)比较差异均有统计学意义(P<0.05);MDG、LDG、SASP与HDG比较差异均有统计学意义(P<0.05);MDG、SASP与LDG比较差异有统计学意义(P<0.05);MDG与SASP比较差异无统计学意义(P>0.05)。2结肠黏膜大体观及组织病理学观察结肠黏膜大体观:HDG同NG接近,MDG及SASP均略差于HDG,但优于LDG,且二者无明显区别。LDG优于MG,MG最差。组织病理学观察:与NG大鼠正常黏膜组织相比较,MG可见大量的炎性细胞浸润,腺体结构破坏,充血、水肿以及糜烂、溃疡形成。HDG黏膜恢复后,情况与NG接近,SASP、MDG、LDG黏膜恢复程度介于HDG与MG之间,其中MDG及SASP优于LDG。3大鼠结肠组织DOR、β-arrestin1、Bcl-2m RNA表达情况DOR:与NG(0.3266±0.0168)比较,MG(0.5319±0.0238)的DORm RNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),经药物治疗后,各治疗组的DORm RNA表达均明显下降,与MG比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HDG(0.3473±0.0110)与MDG(0.3914±0.0245)、LDG(0.4515±0.0209)、SASP(0.3733±0.0191)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MDG、SASP与LDG比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MDG与SASP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。β-arrestin1:与NG(0.3209±0.0186)比较,MG(0.5217±0.0215)的β-arrestin1m RNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);经药物治疗后,各治疗组的β-arrestin1m RNA表达均明显下降,与MG比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HDG(0.3443±0.0141)与MDG(0.4052±0.0289)、LDG(0.4535±0.0269)、SASP(0.3941±0.0256)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MDG、SASP与LDG比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MDG与SASP比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Bcl-2:与NG(0.3217±0.0230)比较,MG(0.5256±0.0273)的Bcl-2m RNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),经药物治疗后,各治疗组的Bcl-2m RNA表达均明显下降,其中HDG(0.3350±0.0142)与NG比较,差异无统计学意义(P>0.05),余治疗组与NG比较,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与MG比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HDG与MDG(0.3797±0.0230)、LDG(0.4349±0.0203)、SASP(0.3573±0.0106)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MDG、SASP与LDG比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MDG与SASP比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1实验证明兰茵凤扬化浊解毒方不仅能改善大鼠腹泻、黏液脓血便等一般情况,促进损伤结肠黏膜的愈合,且在治疗上表现出一定的量-效关系,大剂量组的疗效优于中、低剂量组。2兰茵凤扬化浊解毒方治疗UC的作用机理可能为通过对DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路活化环节的干预,促进肠黏膜中T细胞凋亡,从而恢复肠道免疫稳态。