电针对急性酒精性肝损伤小鼠肝血流灌注及氧化应激反应的影响研究

目的 在本科室的针灸对内脏血流调节效应研究的基础上,应用已建立的激光散斑小鼠内脏血流成像技术,观察急性酒精性肝损伤小鼠肝表面血流灌注量及分布的差异,及电针对急性酒精性肝损伤小鼠肝表面血流灌注分布的调节影响；探索电针对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织氧化应激反应的调节作用,为针灸治疗急性酒精性肝损伤疾病提供理论依据。 方法 实验一：急性酒精性肝损伤小鼠模型的制备及肝组织形态学观察。将16只健康昆明种小鼠随机分为健康对照组和急性酒精性肝损伤模型对照组(模型对照组),每组各8只。首先用50%的乙醇15m1/(kg.bw)给模型对照组8只小鼠灌胃1次,灌胃完后禁食不禁水12小时。然后用颈椎脱臼法将两组小鼠处死并分别迅速取出两组肝组织做肝组织切片和丙二醛(MDA)、超氧化过物歧化酶(SOD)两项指标检测,根据检测结果确认急性酒精性肝损伤模型制备是否成功。然后观察急性酒精性肝损伤模型小鼠肝组织HE染色切片(本科室前期工作已做)肝组织形态的变化。实验二：电针刺激下的急性酒精性肝损伤模型小鼠肝脏表面血流灌注的激光散斑成像的显示,健康昆明小鼠和模型小鼠(按实验一方法制备)各20只分别分为健康对照组、健康电针组、模型对照组和模型电针组。首先在已建立的小鼠肝脏表面血流灌注的激光散斑显像方法的基础上,用激光散斑血流成像仪分别对健康对照组小鼠和模型对照组小鼠各10只做连续30min的肝脏表面血流灌注分布检测以观察各时点肝脏血流灌注量的变化情况。其次是对健康电针组和模型电针组小鼠各10只做连续30min检测,同时分别给这两组小鼠电针“足三里”和“太冲”穴30min,以观察电针刺激过程中小鼠肝脏表面血流灌注量及分布的变化。然后再用激光散斑成像仪的图像分析软件进行数据的提取及分析,分别比较健康电针组、模型电针组在电针过程中各时点与电针Omin时肝脏表面血流灌注的差异,及健康电针组和健康对照组、模型电针组和模型对照组在同一点的肝脏表面血流灌注的差异,以用来分析电针刺激过程中急性酒精性肝损伤模型小鼠及健康小鼠肝表面血流变化的时-效关系。实验三：电针刺激对急性酒精性肝损伤模型小鼠肝组织形态及氧化应激的影响,健康小鼠和模型小鼠各8只(按实验一方法制备),分成健康电针组和模型电针组各8只。两组小鼠电针”太冲”、“足三里”30min后用颈椎脱臼法处死,并迅速取出小鼠肝组织做肝组织切片和MDA、SOD两项指标检测。观察电针对急性酒精性肝损伤模型小鼠肝组织形态的影响,及联合实验一的SOD、MDA结果,分别对健康对照组、健康电针组、模型对照组和模型电针组肝组织的两项生化指标进行比较,探索电针对急性酒精性肝损伤模型小鼠肝组织的氧化应激反应的影响。 结果 实验一结果 1.模型小鼠肝组织HE染色切片(前期工作已做)在光镜下显示有明显的病理改变。 2.模型小鼠SOD含量比健康小鼠明显降低(P<0.05),MDA含量比健康小鼠升高(P<0.05)。 实验二结果 1.模型小鼠肝表面血流灌注激光散斑成像显示：在30min的自然检测中,模型对照小鼠肝表面血流灌注量明显比健康小鼠肝表面血流灌注量低,肝表面血流灌注量周边区也低于中心区,肝表面血流灌注在连续检测过程中有小幅度的波动；健康对照组小鼠肝表面血流灌注量丰富,肝表面周边区血流灌注量比肝表面中心区低,肝表面血流灌注在连续检测过程中有小幅度的波动。 2.电针刺激过程中模型小鼠肝表面血流灌注激光散斑成像显示：在电针30min过程中,模型小鼠和健康小鼠肝表面血流灌注量都在逐渐增加。 3.肝表面血流灌注定量化分析：模型对照组小鼠肝表面血流灌注量明显比健康对照组小鼠低(P<0.05)；模型电针组小鼠在电针25min时肝血流灌注量最高,比0min时增加(9.23±12.79)%,模型电针组在电针25min与0min比较有统计学差异,其它各观察时点与0min比较尚无统计学差异(P>0.05)。模型电针组与模型对照组同一各观察时点比较均具有统计学意义(P<0.05)；健康电针组小鼠在电针25min时肝血流灌注量最高,比0min时增加(12.44±10.92%),健康电针组除电针5min、10min时外其它各观察时点与0min比较均有统计学意义(P<0.05)。健康电针组除电针10min与健康对照组尚无统计学意义(P>0.05),其它同一各时点与健康对照组比较均具有统计学意义(P<0.05)； 实验三结果 1.电针后,模型小鼠肝组织HE切片在光镜下显示肝组织病理性改变有所减轻。 2.肝脏组织MDA的定量化分析：模型电针组小鼠肝脏组织MDA含量显著低于模型对照组(P<0.001)；健康电针组小鼠肝脏组织MDA含量也显著低于健康对照组(P<0.05)。 3.肝脏组织SOD的定量化分析：模型电针组小鼠肝脏组织SOD含量比模型对照组略高,但仍无统计学意义(P>0.05)；健康电针组小鼠肝脏组织SOD含量与健康对照组比较尚无变化(P>0.05)。 结论 1.用50%的乙醇15ml/(kg.bw)灌胃小鼠1次,灌胃完后禁食不禁水12小时,能使小鼠肝组织发生氧化应激反应及病理性改变。 2.激光散斑血流成像技术能够直观、精确记录显示模型小鼠肝脏表面的血流灌注状态及电针刺激过程中肝脏表面的血流灌注的变化。 3.电针可以促使模型小鼠和健康小鼠肝脏血流灌注量增加。 4.电针对模型小鼠肝组织病理形态有一定的修复作用。 5.电针可促进模型小鼠MDA下降,SOD升高；可促使健康小鼠肝组织MDA下降,但对健康小鼠肝组织SOD影响不大。