松茸多糖的分离纯化与抗肿瘤活性的研究

松茸是一种宝贵的食药用真菌,味道鲜美,营养丰富,所含多糖具有良好的抗肿瘤、增强免疫等活性。但目前对松茸的研究多集中于对松茸生长和菌丝体糖蛋白类物质的研究。本文以松茸子实体作为研究对象,对松茸多糖的提取工艺进行优化,分离纯化得到纯多糖,对其进行了酶解;并分别对粗多糖、纯多糖和修饰后多糖的抗肿瘤活性进行了初步研究。具体内容如下: 确定了松茸多糖的较优提取工艺为料液比1:30,在90℃下,浸提3h,提取次数以2次(提取比例为94.3%)为宜;乙醇沉淀的优化条件为3倍体积95%乙醇沉淀6h。采用Sevag法脱蛋白,通过脱色率和多糖损失率两个指标,比较活性炭、过氧化氢、大孔树脂三种脱色方法,确定大孔树脂法是其中最佳的脱色方法(脱色率为54.72%,多糖损失率为37.84%)。经过截留分子量为8000～1000的透析袋透析后,进行DEAE-52纤维素层析,得到洗脱液浓度分别为0、0.2mol/L、0.5mol/L NaCl溶液时的三个组分:松茸水提多糖( TMWEP-1、TMWEP-2、TMWEP-3)。对含量较高的组分TMWEP-2进行Sephadex G-100凝胶层析,用水洗脱,得到两个亚级组分:TMWEP-2Ⅰ和TMWEP-2Ⅱ。通过Sephadex G-100凝胶层析和高校液相色谱分析,对TMWEP-2Ⅰ进行纯度鉴定,证明该组分是分子量分布均匀的纯多糖。对得到的纯多糖TMWEP-2Ⅰ进行薄层层析、紫外光谱分析和红外光谱分析。确定了用蜗牛酶降解松茸多糖的优化条件为:酶解时间5h,酶与底物比1:5,温度40℃,pH值6.0。分别对松茸多糖的粗多糖、纯多糖组分TMWEP-2Ⅰ以及蜗牛酶降解多糖进行了体外抗肿瘤活性的研究。选用SGC-7901、Hela、HT-29三种肿瘤细胞,分10μg/mL、100μg/mL、1000μg/mL三个浓度梯度,用CCK-8法测定多糖对肿瘤细胞的抑制率。结果表明:松茸多糖对三种肿瘤细胞具有抑制作用,抑制率随着纯度和浓度的提高而提高,降解后的多糖没有直接抗肿瘤活性。本文对松茸多糖的分离纯化及抗肿瘤活性的研究扩展了对松茸研究的深度和广度,为松茸多糖更加细致的研究和实际应用奠定了理论基础。