中国李RAPD、ISSR和SSR反应体系的建立及其品种资源遗传多样性分析

中国李是我国和世界广泛栽培的重要果树树种之一。本文选择了56个中国李品种资源（包括2个欧洲李品种），从叶片基因组DNA提取方法入手，在建立和优化中国李RAPD、ISSR和SSR反应分析体系的基础上，利用这三种分子标记对中国李品种资源进行聚类分析，旨在促进中国李品种资源分类和遗传育种研究。结果表明：1、改良陈大明法是提取中国李叶片基因组DNA的适宜方法。2、以5′-GACCGCTTGT-3′为随机引物，建立了优化的中国李RAPD反应分析体系：25μL反应体系中，Taq酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是：1.0u、2.5mmol·L-1、20ng、40ng和0.2mmol·L-1。利用该优化反应体系，用10个随机引物，构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱，并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析，结果表明：5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2％，变异幅度为20.1％～44.9％。3、以5′-（AC）9A-3′为引物建立和优化了中国李ISSR反应分析体系：25μL ISSR反应体系中，Taq酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的最适浓度分别是：0.3u、1.5mmol·L-1、0.2μmol·L-1、20ng和0.16mmol·L-1。利用该优化体系，以5′-（AC）9T-3′为引物，构建了中国李18个品种的ISSR指纹图谱，该引物可将这些品种完全区别开来；以5′-（AC）9C-3′为引物，构建了李属6类种质资源的ISSR指纹图谱，该引物区分率为100％。4、中国李品种适宜的SSR反应分析体系是：25μL SSR反应体系中，Taq DNA聚合酶、Mg2+、每个引物、模板DNA和dNTPs等5种成分的适宜浓度分别是：1.5u、2.0mmol·L-1、0.8μmol·L-1、30～40ng和0.16～0.24mmol·L-1。5、采用RAPD、ISSR和SSR等三种分子标记技术对中国李品种资源54份和2个欧洲李品种进行了遗传多样性分析，并以品种间的遗传相似系数构建了Jaccard聚类树状图。结果表明：中国李品种间遗传相似系数较低，平均为0.451，从分子水平证明了我国中国李品种的遗传多样性很高；将供试中国李品种分为五类，其中第一类是原产我国北方地区的一些品种，第二是原产我国南方地区的一些品种；第三类是从国外引进的品种，并提出了将我国的中国李品种分为北方品种群和南方品种群观点。