目的：
本研究课题拟通过补肾化痰方和利维爱对去卵巢骨质疏松模型大鼠的对比研究,观察去卵巢骨质疏松模型大鼠离体骨密度,血清骨钙素N端中分子片段、25羟维生素D、I型前胶原羧基端前肽,骨髓细胞中BGPmRNA、Cbfa1mRNA表达,骨组织中BMP-2和TGF-β1表达来探讨补肾化痰方对去卵巢骨质疏松模型大鼠的治疗作用及作用机制。
材料与方法：
实验采用切除双侧卵巢的方法,建立大鼠骨质疏松模型。实验动物被分为假手术组、手术模型组、西药治疗组、补肾化痰方中剂量组和补肾化痰方高剂量组。手术三个月后开始灌胃,持续两个月,并用西药利维爱作为对照治疗,假手术组和手术模型组等量生理盐水灌胃。所有大鼠在灌胃两个月后被处死,用双能X线骨密度仪检测大鼠离体骨密度,酶联免疫分析法检测大鼠血清中骨钙素N端中分子片段、25羟维生素D、I型前胶原羧基端前肽水平,RT-PCR方法观察大鼠骨髓细胞中BGPmRNA、Cbfa1mRNA表达,HE方法观察大鼠骨组织形态学变化,免疫组化方法观察大鼠骨组织中BMP-2和TGF-β1表达。
结果：
1、各实验组大鼠离体股骨骨密度比较：与假手术组相比,手术模型组大鼠离体股骨骨密度显著下降,差异有显著性意义；而补肾化痰方中剂量组、补肾化痰方高剂量组和西药治疗组股骨骨密度水平均显著高于手术模型组,差异有显著性意义；中药高剂量组与假手术组比较,差异无统计学意义。2、各实验组大鼠血清骨代谢生化指标比较：和假手术组相比,手术模型组大鼠的血清骨钙素N端中分子片段水平明显升高,差异有显著性意义,而补肾化痰方中剂量组、补肾化痰方高剂量组和西药治疗组大鼠的血清骨钙素N端中分子片段水平均显著低于手术模型组,.差异有统计学意义。在25羟维生素D和I型前胶原羧基端前肽这两个指标方面,手术模型组大鼠血清中的含量显著低于假手术组,差异有统计学意义,而补肾化痰方中剂量、补肾化痰方高剂量和西药利维爱均能显著提升大鼠血清中25羟维生素D和Ⅰ型前胶原羧基端前肽含量。3、各实验组大鼠骨髓细胞中BGPmRNA、Cbfa1mRNA表达比较：RT-PCR检测显示,手术模型组大鼠骨髓细胞中BGPmRNA、Cbfa1mRNA表达水平显著低于假手术组,差异有显著性意义；与手术模型组比较,补肾化痰方中剂量组、补肾化痰方高剂量组和西药治疗组大鼠骨髓细胞中BGPmRNA、Cbfa1mRNA表达水平显著高于手术模型组,差异有统计学意义。4、各实验组大鼠骨组织形态学比较：骨组织HE染色显示,假手术组骨小梁粗大宽厚,形态结构完整,分布均匀,相互连接成网络结构,排列规则,骨小梁未见中断,边缘光滑,各骨小梁之间的间隙小；而模型组与假手术组相比,骨小梁明显显得纤细,连接点少,形态结构不完整,边缘粗糙,且骨小梁分布稀疏零乱,游离末端增多断裂严重,骨小梁间间距较大,出现典型的骨质疏松病理形态改变,说明双侧卵巢切除法已成功复制出大鼠骨质疏松模型。而西药治疗组、补肾化痰方中剂量组和补肾化痰方高剂量组在骨小梁的数量、宽度、完整性方面均明显优于模型组。5、各实验组大鼠骨组织中BMP-2和TGF-β1表达比较：TGF-β1和BMP-2表达主要在定位于骨小梁附近的成骨细胞,在成骨细胞的胞浆中呈阳性显色。在TGF-β1阳性表达方面,假手术组、西药治疗组、中药中剂量组、中药高剂量组在累积光密度值上明显强于手术模型组,经统计学比较,差异有非常显著性意义；中药高剂量组与假手术组、西药治疗组、中药中剂量组比较,差异均没有统计学意义。而在BMP-2阳性表达方面,相比手术模型组,假手术组、西药治疗组、中药中剂量组、中药高剂量组在累积光密度值上均明显增高,经统计学比较,差异有非常显著性意义；中药高剂量组与假手术组、西药治疗组、中药中剂量组比较,差异均没有统计学意义。
结论：
去卵巢后形成的实验性骨质疏松大鼠模型,其骨密度明显降低,血清中25(OH)VD、PICP水平明显降低,N-MID水平明显升高,BGPmRNA. Cbfa1mRNA表达水平显著降低,BMP-2和TGF-β1表达水平显著低于假手术组,出现了典型的骨质疏松症。实验结果表明,补肾化痰方具有升高去卵巢大鼠骨密度,降低血清N-MID水平,升高25(OH) VD、PICP水平,上调骨髓细胞中BGPmRNA、CbfalmRNA表达,上调骨组织中BMP-2和TGF-β,表达水平,减轻去卵巢大鼠的骨质疏松程度。实验证明,补肾化痰方能升高大鼠骨密度,改善大鼠骨髓微环境,增加有利于骨形成的细胞因子,从而发挥治疗骨质疏松的作用。
