基于降糖活性的黄连体内配伍规律初步研究

黄连及其配伍对于2型糖尿病的临床疗效确切,能够显著改善2型糖尿病中糖脂代谢和胰岛素代谢紊乱。然而,黄连在配伍过程中对其配伍对象化学成分体内代谢规律的影响尚不明确。同时,线粒体作为能量调控的重要细胞器,其代谢功能的失调与胰岛素抵制的发生发展具有紧密联系,而目前从线粒体能量代谢的角度探讨黄连配伍改善胰岛素抵制的相关研究也尚为薄弱。在黄连配伍治疗2型糖尿病中存在着黄连与寒凉药配伍和黄连与辛温药配伍两种方式。因此,本课题首先选择组成上以黄连、金银花为主的金芪降糖方为参考药,将方中黄连、金银花、黄芪重新组合,并以以糖耐受受损、胰岛素抵制特点的糖尿病前期为病症模型,从药物代谢动力学层面,考察黄连与金银花、黄芪配伍前后对金银花和黄芪药物代谢动力学行为的影响,以及考察配伍前后对糖尿病前期模型大鼠糖脂代谢和胰岛素代谢的药效表征。同时,本课题对黄连常用配伍对象干姜中姜酚类成分对线粒体产热作用方面进行了初步探索,为课题组进一步从线粒体能量代谢角度探索黄连—干姜配伍规律提供基础。本研究为黄连体内配伍规律研究的进一步开展以及从线粒体能量代谢的角度对黄连与干姜配伍后改善胰岛素抵制的进一步探究提供了参考。主要研究内容与结果如下:1.基于药物代谢动力学的黄连—黄芪/金银花体内配伍规律研究针对药物代谢动力学能够体现药物在体内代谢中相互作用的特点,本研究将黄连、金银花和黄芪组合,分为黄连单用、金银花—黄芪联用和黄连—金银花—黄芪联用三种给药组合,采用以胰岛素代谢紊乱、糖耐量受损为特点的糖尿病前期为病症模型,并运用UPLC-API-MS/MS技术,对金银花—黄芪联用组和黄连—金银花—黄芪联用组大鼠含药血浆中黄芪和金银花代表性成分进行血药浓度监测,以考察黄连对黄芪和金银花代表性成分药物代谢动力学行为的干预作用。结果显示,糖尿病前期模型大鼠在分别灌胃给予金银花—黄芪（黄金组）和黄连—金银花—黄芪（黄金连组）后,通过比较黄芪和金银花5种待测化合物的相关药物代谢动力学参数可以得出,黄芪甲苷在黄连干预下Cmax减小,Tmax增大,AUC0→t增大,T1/2增大,表明黄连能够减缓黄芪甲苷的吸收速率和消除速率,同时增强其吸收程度。芒柄花素的Tmax增加,AUC0→t降低,T1/2减小,说明对于芒柄花素,黄连对其吸收速率、吸收程度减小,消除速率增大。绿原酸在黄连干预下Cmax降低,Tmax增大,同时AUC0→t减小,T1/2增大,说明黄连降低了绿原酸的吸收速率和吸收程度,同时减缓其消除速率。咖啡酸因黄连的干预Cmax减小,Tmax增大,AUC0→t增大,T1/2增大,表明黄连减缓了咖啡酸的吸收速率以及消除速率,但增加其吸收程度。此外,黄金连组中木犀草苷Cmax减小,Tmax增大,T1/2增大,AUC0→t减小,说明对木犀草苷而言,其吸收速率、吸收程度、消除速率均被黄连减缓。本研究结果表明,黄连能够从吸收速率、吸收程度和消除速率三个方面干预金银花和黄芪代表性成分的药物代谢动力学行为。2.黄连与黄芪/金银花对糖尿病前期模型大鼠糖脂代谢和胰岛素代谢的药效学研究继药物代谢动力学研究后,进一步从糖脂代谢和胰岛素代谢两个方面考察黄连单用、金银花—黄芪联用和黄连—金银花—黄芪联用三种给药组合对糖尿病前期模型大鼠的药效表征,以从药效学的角度探讨黄连与金银花、黄芪的配伍规律。结果显示,在黄连、黄芪、金银花三种给药组合中,只有黄连单用能够有效地降低空腹血糖（P<0.05）,金银花—黄芪联用和黄连—金银花—黄芪联用的空腹血糖值较模型组而言更低,但无显著性差异。同时,在三种给药组合中,黄连—金银花—黄芪联用的血清胰岛素水平、HOMA-IR值更低（P<0.05）,表明黄连与黄芪、金银花合用更有利于机体对胰岛素的利用和提升机体对外周胰岛素的敏感性以及改善胰岛素抵制。此外,三种给药组合均能显著降低血清甘油三酯和游离脂肪酸水平（P<0.05）,其中,黄连组效果更好。肝脏病理学检测结果表明各给药组均能缓解肝脏的脂肪累积,并且黄金连组效果更好。本研究结果表明,黄连—金银花—黄芪联用的协同增效作用主要体现在对胰岛素敏感性的增加和对胰岛素抵制的改善。3.基于线粒体能量代谢的干姜中姜酚类成分对线粒体产热的影响针对线粒体能量代谢与胰岛素抵制发生的密切联系,本研究运用微量量热法,对干姜中主要活性物质6-姜酚、8-姜酚和6-姜烯酚对线粒体的产热作用进行考察,分析热谱曲线、计算相关热力学参数和主成分分析,为从线粒体能量代谢的角度探究黄连—干姜配伍改善胰岛素抵制的作用机制奠定基础。结果表明干姜中主要姜酚类化合物6-姜酚、8-姜酚和6-姜烯酚均能提升线粒体产热作用,提示该三种化合物可能是表达干姜辛热药性以及改善胰岛素抵制的关键物质基础。综上所述,本课题首先考察了黄连对金银花、黄芪代表性成分药物代谢动力学行为的干预作用以及黄连与黄芪、金银花配伍前后在对糖尿病前期模型大鼠的药效表征差异,同时针对辛温药干姜有效成分对线粒体产热促进作用进行初步探索。本课题为探究黄连配伍后对相关化学成分的体内作用规律和从线粒体能量代谢角度考察黄连配伍治疗糖尿病提供思路与参考。