平胃散对湿阻中焦证大鼠肝肺肾水通道蛋白影响的研究

实验目的：通过对湿阻中焦证大鼠肝肺肾内水通道蛋白的分布、定量、活性及调控方式的系统研究,探究湿阻中焦证对水通道蛋白的影响,平胃散是否通过影响水通道蛋白的表达分布来调控水液代谢状态,揭示湿阻中焦证引起细胞水液代谢失衡的部分分子机制和平胃散在调控细胞跨膜水转运方面的作用靶点。实验方法：采用前期较为成熟的20天造模湿阻中焦证动物模型,通过测定大鼠胃残留率和肠推进率,选用间苯三酚法测定D-木糖含量,化学比色法测定肝肺肾Na+-K+-ATP酶活性,酶联免疫竞争法（ELISA）测定肝肺肾组织中AQP1、AQP4、AQP8含量和免疫组织化学SP法、平均光密度测定检测肝肺肾组织中AQP1、AQP4、AQP8的表达分布。实验结果：1湿阻中焦证模型的建立：①通过一般情况观察,模型组大鼠体重明显减轻,摄食量及饮水量明显减少,精神状态差。②客观指标检测,模型组大鼠胃排空障碍,血清D-木糖含量降低,Na+-K+-ATP酶活力降低。③给予平胃散药物治疗后,模型组大鼠摄食、饮水、体重、胃残留率、肠推进率、血清D-木糖吸收及Na+-K+-ATP酶活力有所好转。推测湿阻中焦证模型大鼠造模成功。2肝肺肾蛋白的含量造模后,与空白组比,模型组大鼠水通道蛋白含量升高：肾脏AQP1、AQP4和AQP8；模型组大鼠水通道蛋白含量降低：肝脏AQP1、AQP4、AQP8和Na+-K+-ATP酶,肺脏AQP1、AQP4、AQP8和Na+-K+-ATP酶,肾脏Na+-K+-ATP酶。平胃散干预后,与自然恢复相比,平胃散组大鼠水通道蛋白含量升高：肝脏AQP1、AQP4和Na+-K+-ATP酶,肺脏AQP1、AQP4、AQP8和Na+-K+-ATP酶,肾脏AQP1、AQP4、AQP8和Na+-K+-ATP酶；平胃散组大鼠水通道蛋白含量降低：肝脏AQP8。自然恢复后,与模型组相比,自然恢复组大鼠水通道蛋白含量升高：肝脏AQP1、AQP8,肺脏AQP1、AQP4、AQP8,肾脏AQP1、AQP8和Na+-K+-ATP酶；自然恢复组大鼠水通道蛋白含量降低：肝脏AQP8和Na+-K+-ATP酶,肺脏Na+-K+-ATP酶,肾脏AQP4。给予平胃散加泽泻治疗后,与自然恢复组相比,平胃散加泽泻组大鼠水通道蛋白含量升高：肝脏AQP4和Na+-K+-ATP酶,肺脏AQP1、AQP4和Na+-K+-ATP酶,肾脏AQP1、AQP4、AQP8；平胃散加泽泻组大鼠水通道蛋白含量降低：肝脏AQP1和AQP8,肺脏AQP8,肾脏Na+-K+-ATP酶。3肝肺肾蛋白的表达分布造模后,与空白组比,模型组大鼠水通道蛋白表达上调：肝脏AQP1、AQP4、AQP8,肺脏AQP1、AQP4、AQP8,肾脏AQP1、AQP4、AQP8。平胃散干预后,与自然恢复相比,平胃散组大鼠水通道蛋白表达上调：肝脏AQP8；平胃散组大鼠水通道蛋白表达下调：肝脏AQP1、AQP4,肺脏AQP1、AQP4、AQP8,肾脏AQP1、AQP4、AQP8。自然恢复后,与模型组相比,自然恢复组大鼠水通道蛋白表达上调：肝脏AQP1、AQP8,肺脏AQP8；自然恢复组大鼠水通道蛋白表达下调：肝脏AQP4,肺脏AQP1、AQP4,肾脏AQP1、AQP4、AQP8。给予平胃散加泽泻治疗后,与自然恢复组相比,平胃散加泽泻组大鼠水通道蛋白表达上调：肝脏AQP4,肾脏AQP1；平胃散加泽泻组大鼠水通道蛋白表达下调：肝脏AQP1和AQP8,肺脏AQP1、AQP4、AQP8,肾脏AQP4、AQP8。实验结论：湿阻中焦证模型不仅能够影响体内能量代谢,还能够影响肝肺肾三脏AQP1、AQP4、AQP8的蛋白含量及表达分布水平,这可能是湿阻中焦模型导致水液代谢失衡的机制之一；平胃散能够协调Na+-K+-ATP酶活性和肝肺肾三脏AQP1、AQP4、AQP8的蛋白含量及表达分布水平,参与能量代谢和水液代谢输布调控,这可能是平胃散燥湿运脾的作用机制之一。