川骨片防治激素性股骨头坏死实验研究

目的 本研究通过测定BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2、甘油三脂、血浆粘度在激素造摸致股骨头坏死的兔股骨头组织及血清中的表达,研究中药川骨片对激素造摸致股骨头坏死中的影响,深入探讨川骨片对激素性股骨头坏死中成骨细胞、微血管修复、抗凋亡、血脂、血流变学的影响,及其对上述影响产生的信号传导途径和调节系统机制的分子作用机制的探索。 方法 采用Miyanishi方法造模,甲强龙20mg/kg体重臀部肌注,每周2次,同时肌注青霉素16万U和链霉素15万U预防感染。将日本大耳兔分为5组,正常组(12只)、模型组(12只)、阳性对照组(12只)、高剂量组(12只)、低剂量组(12只)；除正常组外,其余各组给予甲基强的松龙20mg/kg体重臀部肌注,每周2次,同时肌注青霉素16万U和链霉素15万U预防感染,川骨片高剂量组每天0.9g／1kg体重.ml／d灌胃；川骨片低剂量组为每天0.3g／1kg体重.ml／d灌胃。对照组左归丸每组给药为1.5g／1kg体重.ml／d灌胃。模型组给予蒸馏水1ml/1kg体重／d灌胃。42天后处死动物,采用组织病理学观察和免疫组织化学方法检测,分析BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2的表达。同时送检血清甘油三脂、血浆粘度。 结果 一般状态：42天末正常组同实验前,模型组结束时兔毛干枯脱落蓬乱,活动摄饮均减少,川骨片高剂量和阳性对照组状态较模型组好。 HE染色结果：模型组呈现骨细胞核固缩,部分核消失,空骨陷窝数较多,坏死骨小梁变细,骨小梁数目减少,毛细血管扩张、淤血,脂肪细胞增大增多,细胞间质出现大量胶原纤维,并有断裂。川骨片高剂量和阳性对照组骨细胞核固缩减少,空骨陷窝数少,部分骨小梁周围成骨细胞缺失,毛细血管扩张、造血细胞增多,脂肪细胞增多明显,细胞间质出现胶原纤维。 股骨头组织免疫组化测定结果：BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2的免疫组化染色阳性物质均呈棕黄色,显微镜下观察：Bcl-2的阳性物质从川骨片高剂量组、阳性对照组、川骨片低剂量组、模型组、正常组有逐渐减少的侵蚀；BMP-2、bFGF、VEGF的阳性物质从模型组、川骨片低剂量组、阳性对照组、川骨片高剂量组、正常组有逐渐增加的趋势。免疫组化染色的阳性物质经经Image-Pro Plus 6.0专业图象分析软件分析量化：川骨片高剂量组、阳性对照组、川骨片低剂量组、模型组与正常组(BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2)比较,有显著差异(P<0.05)；川骨片高剂量组、阳性对照组、川骨片低剂量组与模型组(BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2)比较,有显著差异(P<0.05),川骨片高剂量组、阳性对照组与川骨片低剂量组(BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2)比较,有显著差异(P<0.05)；川骨片高剂量组与阳性对照组(BMP-2、bFGF、VEGF、Bcl-2)比较,无统计学意义(P>0.05)。 甘油三脂和血浆粘度检测结果；与模型组比较,血清VP、S-TG的表达明显下降(P<0.05)；川骨片高剂量组、阳性对照组、川骨片低剂量组、模型组与正常组比较血清VP、S-TG的表达有差异(P<0.05),川骨片高剂量组、阳性对照组川与川骨片低剂量组比较血清VP、S-TG的表达有差异(P<0.05)；川骨片高剂量组与阳性对照组川比较VP、S-TG的表达无统计学意义(P>0.05)。 结论 本研究在成功建立甲强龙诱导日本大耳白兔的股骨头坏死模型的基础上,探讨了中药川骨片对该模型的影响。研究发现：中药川骨片促进成骨细胞的分化增殖、促进微血管的生长、保护骨细胞、促进骨的修复重建。其作用机制可能与川骨片的以下作用有关：通过调节BMP-2、bFGF的表达,促进成骨细胞的分化增殖；调控VEGF的表达,促进骨组织的微血管增生,促进Bcl-2的表达,保护骨细胞。降低甘油三脂和血浆粘度,可增加股骨头血供。