桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠踝关节RANKL/OPG水平的影响

研究背景：类风湿关节炎（RA）是一种以累及周围关节为主的系统性炎症性自身免疫病，致残率高，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要疾病之一。RA主要的致残原因为滑膜炎症、关节血管翳形成后造成的关节骨质破坏。本病为全球性疾病，多发在育龄期妇女，RA的发病率在我国约为0.4％，全球为0.5％～1.0％。其致病因素尚不明确。属中医“痹证”范围。就目前的研究成果来看目前，已经明确破骨细胞（OC)是导致RA发病过程中多关节进行性软骨和骨质侵蚀破坏、骨矿物质密度溶解丢失的重要参与者，而RANK/RANKL/OPG系统是调节破骨细胞分化、成熟和凋亡最重要的信号通路，参与RA骨破坏的基本过程。《金匮要略》中经典方剂桂枝芍药知母汤，因其疗效确切，临床广泛应用于治疗类风湿关节炎。目前研究表明桂枝芍药知母汤可以减轻RA的临床症状，使病情缓解。但桂枝芍药知母汤对于RA的治疗作用的机制还尚不明确，需要近一步的研究。研究目的：采用病理形态学、分子生物学等指标，观察经方桂枝芍药知母汤对CIA模型鼠骨破坏的抑制作用，以免疫抑制剂和非甾类抗炎药作对照，探讨其对骨破坏的作用机制。 实验方法：本研究采用公认的II型胶原诱导性大鼠关节炎模型(collagen—inducedarthritis CIA)，采用免疫抑制剂来氟米特、非甾体抗炎药萘普生作对照，将50只大鼠随机分为5组，即桂枝芍药知母汤组；来氟米特组；萘普生组；空白对照组；模型组共五组。除空白对照组外其他4组均以含II型胶原的完全弗氏佐剂致敏后第14天后，灌胃给药。空白对照组、CIA模型组不做任何处理。观察记录大鼠的一般状况，各个时间关节肿胀程度的变化。在免疫4周后，脱颈处死大鼠，HE染色制作左后肢踝关节病理切片观察病理形态学变化。用原位杂交技术检测CIA大鼠踝关节组织RANKL/OPG的表达水平。探讨桂枝芍药知母汤缓解和抑制CIA大鼠关节骨破坏的作用机理。 结果：在对关节炎的改善程度上，给药2周时，桂芍知母汤组与萘普生及来氟米特组疗效相当，药物干预4周后，桂枝芍药知母汤组优于萘普生组，差异显著(P<0.01)；与来氟米特组疗效相当，差别无意义(P>0.05)；对OPGmRNA、RANKLmRNA光密度值的影响上桂枝芍药知母汤组优于萘普生组，差别有意义(P<0.05)；来氟米特组与桂枝芍药知母汤组相比，疗效相当，差别无意义(P＞0.05)。 结论：桂枝芍药知母汤对CIA模型鼠继发性关节肿胀起有显著的改善作用；其可能通过通过抑制RANKLmRNA的表达水平，提高OPGmRNA的表达水平，起到抑制破骨细胞的分化与活化，达到缓解或阻止关节的损伤破坏的作用。