不同浓度表儿茶素没食子酸酯对体外培养成骨细胞的影响

目的:研究不同浓度表儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对体外培养成骨细胞的影响,确定最大作用浓度(最大抑制浓度或促进浓度)。方法:取新生SD大鼠的颅骨进行成骨细胞诱导培养,第3代细胞中分别加入浓度为0,1,10,20,30和40μmol/L的EGCG+含10%胎牛血清DMEM培养基培养。应用CCK-8法、茜素红染色和硝酸银染色法、ALP试剂盒、ELISA法、Western blot法、观察并测定EGCG对体外培养成骨细胞的增殖、矿化结节形成、碱性磷酸酶活性、骨成型蛋白2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)及对Runx2、BMP-2蛋白表达量的影响。结果:与0μmol/L浓度组比较,EGCG 10～20μmol/L浓度组具有明显促进增殖的作用;30μmol/L及以上浓度组表现出对大鼠成骨细胞的抑制作用;在不同浓度EGCG中培养7天或14天,可以清晰的观察到矿化组织形成,10～20μmol/L EGCG培养的细胞矿化结节形成数量显著多于对照组;10～20μmol/L浓度组碱性磷酸酶活性明显高于其他各组;骨成型蛋白2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)检测显示EGCG10～20μmol/L浓度组促进成骨细胞分泌BMP-2、VEGF的作用最强,30μmol/L及以上浓度对它们的分泌具有抑制作用;经测定,BMP-2、Runx2蛋白的分泌量在EGCG10～20μmol/L浓度组达到最高。结论:EGCG 10～20μmol/L浓度组对体外培养的成骨细胞有明显的促进增殖作用,30μmol/L及以上浓度组表现出对成骨细胞的抑制作用。