芽孢杆菌B1、B2抗菌物质产生条件、理化性质、抗菌机理及其防病研究

拮抗菌的筛选及鉴定 自兰州、榆中、定西等地采集的174份标样中，共筛选至 对豌豆尖镰孢（Fusarium oxysporum f.sp. pisi.）有拮抗作用的细菌110株。从分离部 位看，根围和根表是筛选强拮抗菌的主要部位。从各拮抗菌抑菌圈直径及其所占比例 看，拮抗菌虽广泛分布于各种微生境，但具强抗菌效果的拮抗菌仅占10.9％。本试验 所选用的B1分离自番茄根表土、82分离自辣椒根围土，经鉴定均属芽孢杆菌属（Bacillus spp.），种待定。 B1和B2产生抗菌物质的最适条件 初步研究表明：将B1接种于40mL pH8.0的 D培养液中，27±1℃下光照培养72小时；将B2接种于40mL pH6.0的D培养液中， 27±1℃全天振荡（100r/min）条件下光照培养48小时；将培养菌液离心、除菌， 即得强抗菌效果的两菌无菌液。 B1和B2无菌液抑菌效价及其抗菌谱 初步测定B1、B2抑菌效价均为1000倍， EC50分别为30倍、50倍。两拮抗菌无菌液对同一种病原菌的抗菌效果基本一致。在 测试的13种病原真菌中，对5种病原菌的抑制率为93％～99％，占测试菌总株数 38.5％；对6种病原菌抑制率在70％以上，占46.2％；对豌豆茄镰孢的抑制率最低， 为32％。表明两菌株产生的抗菌物质抗菌谱广、且抗菌效果好。 B1和B2及其无菌液稳定与理化性质 两菌株经连续12次转管继代培养，其 抗菌效果保持相对稳定，在p=0.01水平上无显著差异。无菌液在70℃～100℃下处理 60分钟，抗菌活性基本不受影响，121℃处理30分钟，B1、B2抗菌活性明显下降， 但B2的热稳定性优于B1。两菌抗菌物质耐酸性强、且在偏酸性条件下热稳定性好。 B1和B2抗菌作用的显微特征 同、异步培养试验结果间接说明：拮抗菌与指 示菌之间存在定殖位点的竞争作用。经两菌无菌液处理后的病原菌由灰白色变为白 色，气生菌丝增多且纠结成团。镜检观察其抗菌表现主要是：导致孢子和菌丝畸形、 原生质凝聚，孢子不萌发或萌发异常，菌丝生长点产生大量泡囊、生长受阻，后期菌 丝断裂、泡囊破裂，原生质外泄。 B1和B2抗菌蛋白的提纯及其分子量的测定 595nm下比色测得B1、B2无菌液 中蛋白含量分为1795.53ug/mL和1345.93ug/mL，经70％硫酸铵饱和度分段盐析、 透析、Sephadex G-50柱纯化、PEG6000浓缩后分别纯化出一种抗菌蛋白，经SDS-PAGE 测得其分子量分别为103526.7 Da（B1）和127554.1 Da（B2）。 B；和 B。MeWM的小区翩 B；禾 B。菌原液、 掘侧子 屿用，而稀释10倍B；、娜20倍B。对豌豆种子萌髓促 进作用。小区防治试验结果表明，浸利斗灌根的抗病效果优于单一浸种。与空白对照 ．相比，B；和B晨准u为36·e、54·5O，后者接近多菌灵的防效(62·4％人 财汐经两菌防治后，豌豆根系根毛多且粗，对根系生长具有明显的促进作用。