金银花中绿原酸提取、分离纯化工艺和活性研究

金银花是忍冬科植物忍冬的干燥花蕾，是临床常用的中药材之一；绿原酸是其中主要有效成分，具有显著的清热解毒、抗菌消炎作用，同时还具有增香和护色功能，可用于食品和果品的保鲜防腐。本论文主要用比较研究的方法，研究绿原酸的提取、分离、纯化工艺，并对提取物进行成分鉴别和活性研究。结果如下： 1．提取工艺 用8倍金银花质量体积（g／ml）的70％乙醇在pH值约为4，体系温度60℃条件下，回流振荡浸提2次，每次提取2小时，可使绿原酸提取率大于92％，浸膏提取率约33％，绿原酸含量18．58％。 2．分离纯化工艺 采用两步相结合方案：a．运用Zn2+对提取物初步沉淀分离；b．用JAD—1400大孔吸附树脂进一步分离纯化，同时剔除第一步富集分离时带入的杂质成分。 Zn2+对提取物初步沉淀分离： Zn2+沉淀绿原酸的最佳条件为：在含绿原酸200mg／ml的溶液中，调pH值为5.6，1MZnCl2加入体积量X（ml）与绿原酸沉淀率y（％）的线形回归方程为：y=7.78314+43.39277x；绿原酸-锌盐的最佳转溶条件为：用pH1.5的酸溶液，以料酸比1∶3（v／v）于60℃水中转溶15min，绿原酸转溶率达81.35％以上。 JAD-1400大孔吸附树脂分离纯化： 上样吸附：饱和浓度的提取物溶液，调pH值为3，加NaNO3使之浓度为7％，按每毫升树脂吸附0.83ml饱和溶液，以12ml／min流速上样（层析柱规格：3.5×80cm，树脂体积：721.2cm3）； 洗脱分离：先用蒸馏水按适当流速冲洗2倍床体积，再用20％乙醇以15ml／min流速洗脱1.5倍床体积，后改用45％乙醇按适当的流速洗脱1.5倍床体积，收集馏分，最后用95％乙醇洗脱再生树脂；最后分离收集的馏分浓缩干燥，绿原酸含量为83.3％，得率为38％。 3．提取物成分鉴别和活性研究 利用TLC、HPLC、UV—S分别对提取物进行成分鉴别，得出与对照物有非常 朴！似的图谱，说明提取物中的主要成分就是绿原酸，从而验证“物质分阶’与“活性 分离”的！司步性。 活性研究表明：绿原酸具有抗氧化、清除自山基、抗菌活性。在抗氧化方面， 绿原酸随浓度增加抗氧化能力增强，高纯度强于低纯度的绿原酸，但都要弱于茶多酚。 在清除自山基方面，绿原酸具有较强的清除能力，具有选择性，纯度不同清除能力相 差较大：低纯度绿原酸清除 DPPH、·OH的 IC50分别为 327mg／l、1432mg／l，高纯度 绿原酸相应为 65mg／l、135 mg／l；茶多酚在清除 DPPH能力上要强于高纯度绿原酸， 而在清除·OH能力上却不及低纯度绿原酸，其相应 IC50分别为 52mg／l和 1908 ITlg／1。 在抗菌活性方面，绿原酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用，对金黄 色葡萄球菌抑制，高纯度绿原酸抗菌活性MIC是低纯度绿原酸的2倍，但对大肠杆 菌抑制却没有统计上的差异性；茶多酚抑菌效果要强于绿原酸。