时藏理论是中医理论体系的核心内容,它体现了中医学固有的思维模式,这种“天人相应”的整体观思想贯穿于中医学的生理、病理、诊断、治疗、养生等各个方面,对于我们认识人体的生命活动具有指导作用。从时藏理论入手研究“肾主骨”,以至于对藏象的实质进行研究都具有至关重要的意义。当前,在中医理论的指导下,充分运用传统方法和现代科学技术(包括现代医学技术)去寻找中医学对人体认识的规律,用现代语言阐述中医学的科学内涵,为中医学的发展服务,是中医理论基础研究在相当一段时间内的主要目标。
1.目的:
本课题拟从时藏理论的整体调控思想出发把中医理论体系的传统思维模式融入实验设计和研究之中,以“肾主骨”生理功能的研究为切入点,对中医藏象既基于实质器官又高于实质器官,以“时”测“藏”的内涵进行探讨。通过把整体信息转导观念和松果腺与下属靶腺及细胞信使相结合的研究方法,揭示“肾主骨”的实质,并为中医藏象学说的研究和临床病证病理的深化及防治提供新的方向和靶点。
2.方法:
2.1理论研究:
通过运用方法论的三个层次,即哲学层次、一般方法论层次及具体方法论的层层递进的分析方法,对中医“肾主骨”的中医理论内涵和现代研究的实证进行阐释和分析,提出“肾主骨”是中医肾整体调控顺时适应性调节的具体体现形式,并对其实验研究的切入点进行探讨。
2.2临床研究:
2.2.1设计思路:
中医学脏腑的概念是解剖学、生理学及病理学的综合涵义,尤其是系统功能的单位。中医肾对骨的作用,既有广义之肾--甲状腺轴的调节作用,又离不开解剖学狭义肾的参与。肾脏是参与机体骨代谢的重要器官之一,虽然随着血液净化技术的开展和进步,尿毒症病人的存活率和生活质量明显改善,但肾性骨病的发病率及其危害性却有增高的趋势。本项研究从时藏理论出发,通过冬夏季节肾性骨病患者的肾功能及相应的生化指标的变化,探讨中医“肾主骨”理论的内涵,寻找肾性骨病的主要病理与季节的相关性,为肾性骨病临床因时制宜的预防与治疗提供新的思路。
2.2.2.一般资料
以慢性肾功能衰竭尿毒症的病人为观察对象,按照诊断标准,纳入标准及排除标准,选择2006年中国中医研究院西苑医院维持性血透患者共39例。
2.2.3调查指标:
一般项目包括姓名、性别、年龄、患病时间、开始血透时间、中医诊断、西医诊断、本次血透时间等。调查项目包括肾功能指标、生化指标、血常规等。调查的各项临床检验指标的时间以在夏至和冬至前后7天之内的为准。
2.2.4统计方法:
运用SPSS12.0分析软件进行T检验和单因素方差分析。
2. 3实验研究:
2.3.1设计思路:
本研究以“肾主骨,以应冬气”相关的甲状腺轴和对光敏感的高位节律调节器松果腺为切入点,选择了完成跨膜信号转换的重要信使cAMP、cGMP和IP3为研究对象,来观察生理状态下的甲状腺组织的形态学季节性改变的特点,以及季节性变化对骨代谢的影响。
2.3.2实验动物:
SD大鼠,雄性,180--200 g/只。随机分成生理组,手术组(结扎矢静脉并摘除松果腺组),伪手术组(结扎矢静脉但不摘除松果腺组)。自然光照,自由摄取食水,室温饲养(冬季室温为170C±20C,夏季室温为250C±20C)。在每年冬至、夏至日前一个月对实验大鼠进行松果腺摘除手术和伪手术,术后饲养至冬至日、夏至日,断头处死。
2.3.3检测方法:
IP3含量测定,运用放射免疫法;cAMP、cGMP含量测定,运用酶联免疫法;甲状腺组织形态学,运用光镜观察;BGP含量测定,运用放射免疫法;BALP及CICP含量测定,运用酶联免疫法。
2.3.4统计方法:
分析数据运用SPSS12. 0分析软件进行T检验或单因素方差分析。
3.结果
3. 1理论研究结果
3.1.1中医时藏理论是整体观这一思维模式所决定的,这种思维模式决定了中医学认识人体生命活动的角度注重整体性、统一性和联系性,这种古朴的方法论与现代医学新的医学模式不谋而合,即“生理-心理-社会-环境”的模式。
3.1.2中医时藏理论中的两个主要要素“时”与“藏”具有辩证的关系,“一切存在的基本形式是空间和时间。”(恩格斯语)。“时”作用于“藏”而影响其功能活动,“藏”既是接受“时”的各种信息的靶点,同时又具有时空的某些特征,时藏理论是中医学理论体系的核心。
3.1.3从中医时藏理论认识中医肾整体调控顺时适应性调节的内在机制,应用系统论的观点得以全面诠释。整体性原则、有序性原则、互相联系性原则与动态性原则也正是中医肾整体调控系统的特点所在。
3.1.4从“肾主骨”理论现代研究的内涵中发现:肾与骨在胚胎发生学的同源性和分子生物学水平的相关性表明二者是密切相关的,解剖学狭义的肾与甲状腺轴功能的广义的肾对骨代谢的作用,以及肾对骨顺时适应性的调节实证了“肾”系统功能性单元的内涵。
3.1.5基于时藏理论的“肾主骨”与细胞信号转导的相关性工作假说:“肾主骨”是中医肾整体调控顺时适应性调节作用的具体体现形式,以冬季光照时间短这一外界刺激因素作为激发源,激活第二信使来传递外界的信息,引发体内器官形态及功能的变化,进而产生与冬季相应的生理效应。
3.2临床研究结果
3.2.1冬夏季节对肾性骨病肾功能的影响
CREA与BUN明显高于正常值,呈现冬高夏低的季节性变化趋势。BUN冬夏季节比较有显著性差异,P< 0.05。
3.2.2冬夏季节对肾性骨病甲状旁腺激素的影响PTH冬夏季节比较统计学上无差异,数值呈现冬高夏低季节性变化趋势。
3.2.3冬夏季节对肾性骨病血常规的影响WBC、RBC、HB无冬夏季节比较统计学上无差异,但HB与正常值比较呈现明显下降的趋势。
3.3.4冬夏季节对肾性骨病生化指标的影响
除了CL冬夏季节比较有显著性差异,P< 0.05外,其它指标冬夏季节比较统计学上无差异,但血P含量呈现高于正常值的变化趋势。
3. 3实验研究结果
3.3.1冬夏季节对机体IP3细胞信号转导物质的影响正常对照组:下丘脑IP3含量表现为冬低夏高,P<0.05;甲状腺IP3含量呈现冬低夏高,P< 0.01。
摘除松果腺手术组:下丘脑与甲状腺正常冬夏季节差异消失。
3.3.2冬夏季节对机体cAMP、cGMP细胞信号转导物质的影响cAMP:正常对照组:下丘脑cAMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01,伪手术组cAMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01。
垂体cAMP含量表现为冬低夏高,P< 0.05,伪手术组cAMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01。
甲状腺cAMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01,伪手术组cAMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01。
摘除松果腺手术组:下丘脑、垂体正常冬夏季节差异消失。甲状腺冬夏手术组之间有显著性差异,P< 0.01
cGMP:正常对照组:下丘脑cGMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01,伪手术组cGMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01。
垂体cGMP含量表现为冬低夏高,P< 0.05。
甲状腺cGMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01,伪手术组cGMP含量表现为冬低夏高,P< 0.01。摘除松果腺手术组:下丘脑冬夏手术组之间有显著性差异,P< 0.01;垂体冬夏手术组之间有显著性差异,P< 0.05;甲状腺正常冬夏季节差异消失。cAMP/cGMP:正常对照组:下丘脑、垂体及甲状腺cAMP与cGMP含量相比较均有cAMP高cGMP低的变化,cAMP/cGMP下丘脑、垂体及甲状腺均无显著性差异,P>0.05,但甲状腺的cAMP/cGMP同样呈现冬低夏高的变化趋势。摘除松果腺手术组:手术组垂体cAMP/cGMP数值显示冬夏季节性消失。
3.3.3冬夏季节对机体血清骨代谢的影响生理组CICP含量呈现冬高夏低的变化趋势;BALP含量呈现冬高夏低,P< 0.01;BGP含量冬夏之间无差异,P〉0.05;CICP、BALP及BGP手术组冬夏季节性消失。四时模拟冬至组与夏至比较无差异,P〉0.05,但CICP、BALP呈现冬高夏低变化趋势。
3.3.4冬夏季节对机体甲状腺组织的影响冬夏季节对正常对照组甲状腺组织的影响有差异,对摘除松果腺手术组影响不大。
3.3.5基于时藏理论的“肾主骨”工作机制大体模型:冬季光照时间的缩短,经过视网膜--下丘脑视交叉上核--松果腺途径,促使松果腺分泌较多的褪黑素。MT通过位于细胞膜上高亲和性G蛋白偶联受体直接作用于甲状腺轴,启动细胞内第二信使系统。通过抑制cAMP的生理反应,调节IP3的代谢活动而调整细胞的生理效应,甲状腺组织的形态学改变以使甲状腺激素分泌增加,进而引起骨代谢指标BALP、CICP水平的增加以加强成骨细胞代谢,同时T3还可以调节破骨细胞的活性,最终结果使骨代谢活性的增强表明骨贮藏物质与能量以应冬气,并为春生、夏长做准备。
4.结论
本研究从细胞信号转导的角度探讨冬夏季节甲状腺轴对骨代谢的调节作用,结果表明:下丘脑、垂体、甲状腺由于冬夏季节的变化表现有第二信使的季节性变化特点,并使甲状腺的形态学发生季节性改变,进而使骨代谢也呈现季节性的变化特征,这与中医学“肾主骨”,“肾应冬”,“主蛰藏”的认识是一致的,由此更说明了五脏是时藏的理论,即有解剖形态学的基础,同时又是功能系统的单位。从时间结构的“时”的角度出发来研究中医“脏”的实质是中医学“天人相应”整体调控顺时适应性调节的特点决定的,并且证明“肾主骨”是中医肾整体调控顺时适应性调节的具体体现形式,方法论三个层次上的阐释属于原创性思想的创新性研究。
本课题立足整体调节,以中医整体思维模式对“肾主骨”的实质研究进行理论、临床和实验研究,符合中医时藏整体观和中医藏象的特点,与作为现代生物科学的前沿热点课题--细胞信号转导的结合,为中医基础理论尤其是藏象学说的研究提供了指导意义。本课题通过对冬夏季节肾性骨病主要病理观察,首次发现肾功能等各项指标的季节性变化,为临床肾与骨相关性疾病因时制宜的预防和治疗提供了指导性的作用。
