葡多酚对乳腺癌抑制作用的体内外研究

目的：葡多酚（grape procyanidin，GPC），是从葡萄核中提取的一种天然多酚类物质，据国内外研究报道GPC具有抗肿瘤、抗突变、抗氧化、抗自由基等生物学功效。本试验采用体外和体内两种实验方法，研究葡多酚（GPC）对正常乳腺细胞和乳腺癌细胞增殖活性的影响作用。 方法： 1、体外试验： 1．1人乳腺癌细胞：取人乳腺癌细胞与不同浓度的GPC共同体外培养，同时分别取高、中、低GPC组加入环磷酰胺，用MTT法观察GPC对乳腺癌细胞增殖活性的抑制作用以及GPC与环磷酰胺对乳腺癌细胞的协同作用。 1．2正常人乳腺细胞：将正常人乳腺细胞给予不同浓度的GPC，共同培养24h，用MTT法测其增殖活性。 2、体内试验： 无菌条件下取皮下接种EMT-6乳腺癌细胞株第13天的小鼠的瘤组织，用生理盐水制备细胞悬液，调节细胞密度为1×10～6个／毫升，于受试动物右乳腺区皮下注射0.1ml。将全部已接种瘤细胞的小鼠随机分为4个组，每组10只。其中设3个GPC组，于接种瘤细胞的前一天开始分别给予200mg／kg、100mg／kg、10mg／kg的GPC经口灌胃，每天一次，连续十四天。肿瘤对照组按同样方法给予等量蒸馏水。接种后第14天，全部处死。取乳腺癌组织用MTT法测各组小鼠乳腺癌细胞的增殖活性和免疫组化的方法检测各组小鼠乳腺癌细胞的p53和PCNA的表达水平。 结果： 1．体外试验 1．1葡多酚（GPC）对乳腺癌细胞增殖活性的影响：培养相同时间，20、50、100和200mg／mlGPC各组0D值分别为0.518±0.010，0.449±0.023，0.412±0.006和0.383±0.010，低于正常对照组OD值，差异均有显著性意义（p＜0.05）。随GPC终浓度的升高，各组OD值呈降低趋势，而抑制率呈升高趋势。环磷酰胺+高、中剂量的GPC组OD值与环磷酰胺组、肿瘤对照组OD值比较，均有明显降低，差异有显著性意义（p＜0.05），而环磷酰胺+低剂量的GPC组OD值与环磷酰胺组OD值之间的差异无显著性意义（p＞0.05）。GPC对乳腺癌细胞增殖活性有抑制作用且呈一定的浓度依赖关系，且葡多酚与环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖活性存在协同抑制作用。 1．2葡多酚（GPC）对正常乳腺细胞增殖活性的影响：10mg／mlGPC组OD值与正常对照组之间的差异无显著性意义（P＞0.05）。20、50、100和200mg／mlGPC各组OD值分别为0.261±0.021，0.358±0.028，0.421±0.020和0.512±0.034，高于正常对照组OD值，差异均有显著性意义（p＜0.05）。结果提示GPC可促进正常乳腺细胞的增殖活性，并呈现剂量效应关系。 2体内试验 2．1葡多酚（GPC）对小鼠乳腺癌细胞增殖活性的影响 肿瘤对照组的增殖活性为1.098±0.167，高、中剂量GPC组的增殖活性分别为0.714±0.037和0.881±0.120，经统计学t检验，差异有统计学意义（P＜0.05），低剂量GPC组的增殖活性为1.097±0.205，经统计学t检验，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。 2．2 PCNA和突变型p53蛋白的表达。 肿瘤对照组PCNA蛋白和突变型p53蛋白呈高表达，PCNA增殖指数和突变型p53蛋白阳性表达率分别为72.78％和37.22％，高剂量GPC组两者皆呈低表达，分别为28.32％和7.46％，x2检验差异有统计学意义（p＜0.01）。中剂量GPC组两者的阳性表达率介于肿瘤对照组和高剂量GPC组之间。低剂量GPC组分别为72.02和37.44％，与肿瘤对照组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论： 1．葡多酚（GPC）对乳腺癌细胞的增殖活性有一定抑制作用。 2．葡多酚（GPC）对正常乳腺细胞的增殖活性有一定促进作用。 3．葡多酚（GPC）与环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖活性存在协同抑制作用。 4．本试验为葡多酚（GPC）在预防和治疗乳腺癌疾病方面的功效研究和开发利用提供科学依据。