小鼠高脂晚餐对肝脏生物钟和脂质生成基因表达影响以及蛇床子素干预作用研究

目的：观察定时高脂晚餐是否会影响小鼠肝脏生物钟和PPARα介导脂质生成相关基因的表达量和节律性的改变；在此基础上进一步观察不同时间给予等量蛇床子素干预作用的差异。 方法：选用ICR雄性小鼠，以晚上定时给予高脂饮食和严格控制明/暗条件（8:30-20:30/20:30-次日8:30）4周复制高脂性脂肪肝小鼠模型，然后分别在不同授时时相（6:00，12:00，18:00和24:00）或经不同时间（早给药组，晚给药和早晚给药组）等量蛇床子素(20mg/kg)治疗4周后处置，用比色法测定肝中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)含量；用光镜检查肝脏的形态学变化；采用RT-PCR法检测小鼠肝脏生物钟基因Clock、Bmal1、Per1-2和Cry1-2，以及过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPAR α)和PPARα介导的脂质生成基因包括胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、脂蛋白酯酶(LPL)、二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)和脂肪酸合酶(FAS)mRNA表达的情况。 结果：实验结果显示，晚上定时给予高脂饮食后，可致小鼠肝脏中TC和TG含量升高，特别是在6:00，18:00和24:00，而且与正常对照组相比，TC含量的峰值延迟了6h而TG含量的峰值提前了12h。同时伴有肝脏生物钟基因Clock、Bmal1、Per2和Cry2mRNA表达在节律或振幅上发生明显的变化，钟控基因PPARα以及它介导的靶基因CYP7A1、HMGCR、LDLR、LPL和DGAT mRNA表达在节律或振幅上亦发生明显的改变，尤其是CYP7A1和DGAT的基因表达改变更为明显。 如以不同时间给予等量蛇床子素治疗高脂性脂肪肝4周后，则肝脏中的TC和TG含量可降低，但程度有所不同。蛇床子素晚给药组可显著下调肝脏钟基因Clock和Bmal1mRNA的表达，而早给药组则明显下调Per1mRNA的表达，不同时间给药组均能明显下调Cry2mRNA的表达。小鼠肝中的PPAR α mRNA在不同时间给药组均有不同程度的上调，尤以早晚给药组的最为明显，同时伴有各个给药组CYP7A1和早给药组LPL mRNA表达的上调；相反地，肝中的LDLR mRNA表达在各个给药组均下调，肝中的DGAT mRNA表达在晚给药组和早晚给药组也明显下调。 结论：小鼠定时高脂晚餐会改变肝脏内部分生物钟基因的节律表达，以及影响PPARα介导脂质生成基因表达的节律性，从而导致肝脏脂质的增加及昼夜节律的改变。不同时间给予等量蛇床子素治疗高脂性脂肪肝后，肝脏的脂质含量降低程度会有所不同，这可能与不同时间给药对脂肪肝小鼠肝脏生物钟基因节律表达的影响不同有关，继而导致PPARα及它的靶基因表达不同而产生不同的治疗效果。