“肾主生殖”的理论探讨及机理研究

目的 探讨“肾主生殖”的理论,观察同一补肾中药补肾毓麟汤对雌、雄性大鼠生殖功能障碍模型的生殖功能改善作用,从分子水平初步阐明补肾毓麟汤的作用机理,初步揭示“肾主生殖”的科学内涵。 方法 ①本实验分雌性大鼠和雄性大鼠两大组,每大组各分4小组:将3月龄SD雄性、雌性大鼠各40只随机各取10只作为正常对照组,其余各30只大鼠予雷公藤多苷片30mg/kg/d灌胃,连续30天,建立生殖功能障碍模型。造模完成后,分别将雌、雄性大鼠随机分为模型组、克罗米芬组、补肾毓麟汤组。造模结束后开始给药,连续给药30天。②观察检测雌性各组大鼠动情周期、卵巢及子宫湿重;雄性各组大鼠睾丸、附睾湿重及精子密度与活率。③放射免疫法检测雌、雄性各组大鼠血清生殖激素卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）含量。④放射免疫法检测雌、雄性各组大鼠血清表皮生长因子（EGF）含量,免疫组化法检测雌、雄性各组大鼠生殖器官组织表皮生长因子受体（EGFR）表达情况。⑤光镜观察雌性各组大鼠子宫组织结构改变、雄性各组大鼠睾丸组织结构;透射电镜观察雌性各组大鼠卵巢组织结构改变、雄性各组大鼠睾丸组织结构。⑥流式细胞仪检测雄性各组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况,用免疫组织化学法检测雄性各组大鼠睾丸组织凋亡相关基因bcl-2、bax的表达情况。 结果 ①雌性大鼠动情周期变化:模型组大鼠动情周期缺失、不完整、延长,动情周期正常的大鼠数量少于正常组（P<0.05）;克罗米芬组、补肾毓麟汤组动情周期正常的大鼠数量高于模型组（P<0.05）。雌性大鼠卵巢指数及子宫指数测定:卵巢指数各组间无显著性差异;模型组子宫指数低于正常组（P<0.05）;克罗米芬组、补肾毓麟汤组子宫指数高于模型组（P<0.05、P<0.01）。②雄性大鼠睾丸及附睾指数测定:模型组睾丸、附睾较小且苍白,表面晦暗无光泽,弹性差,睾丸与附睾指数均小于正常组（P<0.05）;克罗米芬组睾丸、附睾大小、弹性与模型组相似,睾丸与附睾指数小于正常组（P<0.05）;补肾毓麟汤组睾丸、附睾光泽红润,弹性好,睾丸与附睾指数大于模型组（P<0.05）。雄性大鼠附睾精子密度、活率测定:模型组附睾精子密度、活率明显低于正常组（P<0.01）;克罗米芬组附睾精子密度、活率低于正常组（P<0.05）;补肾毓麟汤组附睾精子密度、活率与模型组相比明显增加（P<0.01）。③雌性大鼠血清生殖激素含量:各组大鼠血清FSH、LH、E2含量无显著性差异;模型组大鼠血清T含量高于正常组（P<0.05）;克罗米芬组、补肾毓麟汤组大鼠血清T含量低于模型组（P<0.05）。雄性大鼠血清生殖激素含量:各组大鼠血清FSH含量无显著性差异;模型组大鼠血清LH、E2含量高于正常组（P<0.05、P<0.01）,血清T含量明显低于正常组（P<0.01）。克罗米芬组、补肾毓麟汤组血清LH含量下降,与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。克罗米芬组大鼠血清E2含量明显高于正常组（P<0.01）;补肾毓麟汤组血清E2含量下降,与模型组比较有极显著性差异（P<0.01）。克罗米芬组大鼠血清T含量低于正常组（P<0.05）;补肾毓麟汤组血清T含量升高,与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。④雌性大鼠血清EGF含量:模型组大鼠血清EGF含量高于正常组（P<0.05）;克罗米芬组和补肾毓麟汤组血清EGF含量较模型组下降（P<0.05）。雄性大鼠血清EGF含量:模型组大鼠血清EGF含量明显低于正常组（P<0.01）,克罗米芬组和补肾毓麟汤组较模型组显著升高 湖北中医学院 2002级博士研究生学位论文 （P<0.似）。雌性大鼠卵巢EGFR表达:EGFR在正常雌性大鼠卵巢组织为弱阳 性表达,而模型组卵巢组织EGFR表达为强阳性,克罗米芬组与补肾毓麟汤组卵 巢组织EGFR阳性表达均较模型组弱。雄性大鼠肇丸EGFR表达:EGFR在正常雄 性大鼠肇丸组织有强阳性表达,而模型组肇丸组织EGFR表达为弱阳性,克罗米 芬组与补肾毓麟汤组血清EGF含量肇丸组织EGFR的阳性表达均较模型组强。⑤ 生殖器官显微结构、超微结构观察:雌性模型大鼠子宫部分肌层及肌纤维变薄变 细,卵巢卵泡细胞核不规则、部分细胞器扩张;克罗米芬组子宫肌层较薄,卵巢 卵泡细胞核不规则;补肾毓麟汤组子宫肌层增厚,卵巢卵泡细胞核规则,未见细 胞器扩张。雄性模型大鼠曲细精管上皮中多数精母细胞变性、死亡,精子细胞不 发育,无精子形成,管腔中无精子,支持细胞有明显病变;克罗米芬组除生精上 皮中有许多脂质球状体外,其余变化基本上同模型组;辛卜肾毓麟汤组的生精上皮 层次丰富,各级生精上皮细胞及精子细胞发育良好,与正常组相似。⑥雄性大鼠 肇丸生精细胞凋亡数、凋亡率测定:模型组大鼠肇丸生精细胞出现大量凋亡细胞, 凋亡率较高,克罗米芬组凋亡细胞数及凋亡率低于模型组（P<0.05）,补肾毓麟 汤组凋亡细胞数及凋亡率明显低于模型组（P<0.01）。雄性大鼠肇丸组织凋亡相 关基因表达情况:bcl一2蛋白在正常雄性大鼠肇丸组织有强阳性表达,而模型 组肇丸组织bcl一2蛋白表达为弱阳性,克罗米芬组与补肾毓麟汤组肇丸组织EGFR 的阳性表达均较模型组强。bax蛋白在正常雄性大鼠肇丸组织为弱阳性表达,而 模型组肇丸组织bax蛋白表达为强阳性,克罗米芬组与补肾毓麟汤组肇丸组织 bax蛋白阳性表达均较模型组弱。 结论本课题对“肾主生殖”理论进行了深入探讨,通过实验研究发现,雌