预防性应用5-HT3受体拮抗剂对内脏痛高敏感幼鼠痛敏感性及结肠P物质表达的影响

目的采用行为学和电生理学评价方法,探讨预防性应用5-HT3受体拮抗剂对新生期反复结直肠刺激(Colorectal Irritation,CI)建立内脏痛觉高敏感性模型幼鼠内脏痛觉敏感性影响;比较各组幼鼠结肠P物质(substance P,SP)表达,探讨结肠SP异常表达在幼鼠内脏痛觉高敏形成中作用,为临床上采取有效防治措施及开发治疗药物提供理论依据。 方法①32只SD新生大鼠按2×2析因设计分成4组,每组8只,A1B1组:新生期反复CI,建立幼鼠内脏痛觉高敏感模型,15～21d腹腔注射雷莫司琼;A1B2组:新生期反复CI,建立幼鼠内脏痛觉高敏感模型,15～21d腹腔注射生理盐水;A2B1组:新生期未接受CI,15～21d腹腔注射雷莫司琼;A2B2组:新生期未接受CI,15～21d腹腔注射生理盐水。常规饲养到幼鼠期(6周龄),通过观察大鼠在不同压力结直肠扩张(Colorectal Distension ,CRD)刺激后的腹壁撤退反射(AWR)评分、内脏痛阈和腹外斜肌放电测量进行内脏痛觉敏感性评价,选取降结肠进行病理学检查。②32只SD新生大鼠按2×2析因设计分成4组,每组8只,A1B1组:新生期反复CI,建立幼鼠内脏痛觉高敏感模型,15～21d腹腔注射雷莫司琼;A1B2组:新生期反复CI,建立幼鼠内脏痛觉高敏感模型,15～21d腹腔注射生理盐水;A2B1组:新生期未接受CI,15～21d腹腔注射雷莫司琼;A2B2组:新生期未接受CI,15～21d腹腔注射生理盐水。常规饲养到幼鼠期(6周龄),应用免疫组织化学染色及计算机图像分析系统对结肠进行积分光密度值半定量分析。采用SPSS13.0软件包进行统计分析,α=0.05为显著性检验标准。 结果①幼鼠6周龄时,新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型可使痛阈降低,新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型的使AWR评分升高,新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型对于AWR评分的主效应在各个CRD压力下都有统计学意义(F值分别是47.79、6.61、26. 30、4.84,均P<0.05);预防性应用雷莫司琼对于AWR评分降低,预防性应用雷莫司琼对于AWR评分的主效应在各个CRD压力下也都有统计学意义(F值分别是23.74、11.88、4.74、4.20、4.76,均P<0.05)。新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型可使幼鼠腹外斜肌放电幅值在各个压力下均升高,新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型对幼鼠腹外斜肌放电幅值主效应在各不同CRD压力下均有显著意义(F值分别为9.00、6.50、8.99、4.02、4.98,均P≤0.05);降结肠未见明显病理组织损伤。②幼鼠6周龄时,A1B2组中结肠黏膜层、粘膜下层、肌层内均出现密集棕黄色免疫阳性产物,SP阳性细胞多;A1B1组、A2B1组及A2B2组,结肠黏膜层、粘膜下层、肌层内仅有极少量SP阳性细胞,免疫阳性产物着色浅淡,SP积分光密度值A1B1组肌层大于粘膜下层、粘膜层,差别有统计学意义,A1B2、A2B1、A2B2组各层积分光密度值均未见明显差别。进一步对新生期CI及预防性应用雷莫司琼对于幼鼠结肠各层积分光密度值的主效应值进行随机区组的方差分析,结果表明:粘膜层与肌层的的SP积分光密度值差别有统计学意义(P=0.002),粘膜下层与肌层的SP积分光密度值差别也有统计学意义(P=0.004),粘膜层与粘膜下层的SP积分光密度值差别没有统计学意义(P=0.139);幼鼠结肠粘膜层、粘膜下层、肌层SP积分光密度值均受到新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型和预防性应用雷莫司琼影响,新生期CI建立幼鼠内脏痛觉高敏感性模型,其结肠各层SP积分光密度值均明显增加,预防性应用雷莫司琼其结肠粘膜SP积分光密度值均明显减少。 结论①新生期持续CI会造成幼鼠痛阈下降,出现慢性内脏高敏感性,且没有明确的组织病理学改变;预防性应用5-HT3受体拮抗剂雷莫司琼能够降低幼鼠内脏痛觉的高敏感性。②该模型内脏痛觉高敏感性发生机制可能与SP表达增高有关。