不同炮制方法对雷公藤的减毒保效作用及减毒机制的初步研究

目的：运用现代药理学和分子生物学方法,初步探讨中药雷公藤通过不同方法炮制 后的毒性和药效的变化及可能的减毒机制,为雷公藤的进一步开发利用提供实验依据。 方法：(1)急性毒性的测定：采用改良寇氏法测定雷公藤生品及不同炮制品的LD50和95%可信限。 (2)毒性实验：小鼠每天均按24g/kg灌服雷公藤生品及不同炮制品的水煎液,1次/d,连续14d后,检测：①脏器系数(心、肝、脾、肺、肾)；②血液学指标(红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞)；③血液生化指标(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、白蛋白、球蛋白、肌酐、尿素氮)；④肝肾组织病理学检查。 (3)减毒机制的初步研究：采用ELISA法检测肝肾组织中谷胱甘肽还原酶(GR)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；采用免疫组织化学染色法、RT-PCR技术检测肝肾组织内Bax、Bcl-2蛋白和基因的表达情况。 (4)抗炎作用的实验研究：采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验和大鼠棉球肉芽肿实验,观察毒性明显降低的雷公藤不同炮制品对抗炎作用的影响。 结果：(1)雷公藤生品组的LD50=111.45g/kg,经过炮制后毒性均有所下降,急性毒性由大到小排列为：雷公藤生品组>雷公藤酒炙品组>雷公藤清炒品组>雷公藤水煮品组>雷公藤醋炙品组>雷公藤蒸制品组>雷公藤甘草炮制品组>雷公藤莱菔子炮制品组。 (2)雷公藤生品可使肝脏肿大,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、球蛋白、血清中的肌酐和尿素氮含量明显升高,而白蛋白、白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板明显减少,肝肾组织病理学检查显示肝细胞出现空泡和局灶性炎性,肾小管上皮细胞出现轻、中度浊肿,提示雷公藤生品对肝、肾及血液系统有明显的毒性。雷公藤经过不同方法炮制后毒性均有所降低,其中以雷公藤莱菔子炮制品组、雷公藤甘草炮制品组和雷公藤蒸制品组的毒性降低最为明显。 (3)与正常对照组比较,雷公藤生品组的肝肾组织中GR与SOD活性显著降低,而MDA含量则明显升高；Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达明显减少,而Bax蛋白和BaxmRNA表达明显增多,提示雷公藤生品对肝肾组织的毒性,可能与其诱导细胞氧化损伤及凋亡有关。经过不同方法炮制后,雷公藤不同炮制品组较生品组肝肾组织中的GR、SOD活性均有不同程度的升高,MDA含量均有不同程度的减少；肝肾组织中的Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA的表达量明显增多,Bax蛋白和Bax mRNA表达量明显减少,其中以雷公藤莱菔子炮制品组的影响最为明显。 (4)雷公藤不同炮制品对二甲苯所致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀及大鼠棉球肉芽肿的生成均有明显抑制作用,其抑制作用随剂量增加呈现一定的量效关系,其中雷公藤莱菔子炮制品的抗炎作用优于雷公藤生品。 结论：雷公藤通过不同方法炮制后毒性均有所降低,尤以雷公藤莱菔子炮制品、雷公藤甘草炮制品和雷公藤蒸制品的毒性降低最为明显,且均具有较好的抗炎作用,其中以雷公藤莱菔子炮制品的抗炎作用最佳；其毒性降低可能与炮制后的雷公藤诱导肝肾组织氧化损伤和细胞凋亡的作用减弱有关,其中以雷公藤莱菔子炮制品的减弱作用最为明显。